| Viral Double-Stranded RNA Detection by DNase I and Nuclease S1 digestions in Leishmania parasites
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Many RNA viruses are found in protozoan parasites. They can be responsible for more serious pathology or treatment failure. For the detection of viral double-stranded RNA (dsRNA), sequence-dependent and -independent methods are available, such as quantitative real-time PCR and immunofluorescence, dot blot, ELISA or sequencing. The technique presented here is sequence-independent and is well detailed in the following protocol, taking the example of Leishmania RNA virus (LRV) in Leishmania guyanensis (Lgy) species. To summarise, the protocol is divided into four major steps: RNA extraction from the parasites, RNA purification, enzymatic digestions with DNase I and Nuclease S1, and visualization by gel electrophoresis. This method can be used to detect other viral ...
[摘要] [摘要 ] 原生动物寄生虫中发现了许多RNA病毒，它们可能导致更严重的病理或治疗失败。对于病毒双链RNA（dsRNA）的检测，有序列依赖性和非依赖性方法，例如定量实时PCR和免疫荧光，斑点印迹，ELISA或测序。此处介绍的技术是与序列无关的，并且在以下协议中进行了详细说明，以利什曼原虫（Legymania guyanensis）（Lgy ）中的利什曼原虫RNA病毒（LRV）为例 概括地说，该协议分为四个主要步骤：从寄生虫中提取RNA，RNA纯化，使用DNase I和Nuclease S1进行图解消化以及通过凝胶电泳进行可视化。该方法可用于检测其他病毒dsRNA它提供了一个额外的工具，可以对先前引用的其他技术进行补充，并且很容易实现。
[背景 ] 广泛的多样性RNA病毒中存在的原生动物寄生虫一直都有详细记载（王和王，1991;戈什等人，2011;桑戈等人。2014;碱液等人，2016年Akopyants 等人2016 ; Fernandez- Presas 等人，2017; Grybchuk 。等人。，2018）。此外，这些病毒已经被描述为潜在的毒力因子（Fichorova 等人，2013; EL- Gayar 。等人，2016; 拉特等。，2019）特别值得注意的，存在的内共生体。利什曼原虫RNA病毒（LRV），A ...
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| Macrophage Survival Assay Using High Content Microscopy
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Macrophages maintain tissue homoeostasis by regulating inflammation and tissue repair mechanisms. Thus, the fate of macrophages has an impact on the state of the tissue. The aim of this protocol is to quantify macrophage survival using high content microscopy and image processing software. Here, we describe a high-content image based protocol to assess the effect of diverse stimuli in combination with pharmacological treatments on macrophage survival in a quantitative, unbiased and high-throughput manner.
[摘要] 巨噬细胞通过调节炎症和组织修复机制来维持组织均匀平衡。 因此，巨噬细胞的命运对组织的状态有影响。 该方案的目的是使用高含量显微镜和图像处理软件来量化巨噬细胞存活。 在这里，我们描述了一种基于高含量图像的方案，以定量，无偏差和高通量方式评估不同刺激与药理学治疗对巨噬细胞存活的影响。
【背景】巨噬细胞是吞噬先天免疫细胞，是组织炎症的主要驱动因素（Medzhitov，2008）。 这些细胞与自身免疫，自身炎症，感染性，神经变性和代谢性疾病一起与癌症相关（Ginhoux和Jung，2014）。 在这种情况下，巨噬细胞在炎症中的作用得到了很好的研究，然而，非传染性和感染性疾病中巨噬细胞存活的影响在很大程度上是未知的。 我们的研究表明，某些病原体相关受体（PRR）的激活可以诱导巨噬细胞存活（Eren等，2016）。 我们描述了一种分子机制，证明专门的细胞内病原体如何利用PRR诱导的细胞存活（Eren等，2016）。 因此，需要进一步的研究来了解巨噬细胞存活在不同疾病环境中的作用。
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| Detection of ASC Oligomerization by Western Blotting
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] The apoptosis-associated speck-like protein with a caspase-recruitment domain (ASC) adaptor protein bridges inflammasome sensors and caspase-1. Upon inflammasome activation, ASC nucleates in a prion-like manner into a large and single platform responsible for the recruitment and the activation of caspase-1. Active caspase-1 will in turn promote the proteolytic maturation of the pro-inflammatory cytokine IL-1β. ASC oligomerization is direct evidence for inflammasome activation and its detection allows a read-out independent of caspase-1 and IL-1β. This protocol describes how to detect the oligomerization of ASC by Western blot.
[摘要] 具有半胱天冬酶募集区（ASC）衔接蛋白的凋亡相关斑点样蛋白桥联炎症体传感器和半胱天冬酶-1。在炎性体活化后，ASC以类似朊病毒的方式成核，成为负责募集和激活半胱天冬酶-1的大而单一的平台。活性胱天蛋白酶-1将反过来促进促炎细胞因子IL-1β的蛋白水解成熟。 ASC寡聚化是炎性体激活的直接证据，其检测允许读取与caspase-1和IL-1β无关。该方案描述了如何通过蛋白质印迹检测ASC的寡聚化。
背景 Inflammasomes是大量的多蛋白平台，其感测各种微生物，内源和环境胁迫因子，导致促炎IL-1细胞因子家族的成熟（Martinon等人，2002; Sharma和Kanneganti， 2016）。激活后，炎性细胞传感器通过pyrin结构域（PYD）-PYD同型相互作用募集衔接蛋白ASC。 ASC通过胱天蛋白酶激活和募集域（CARD）-CARD相互作用又结合半胱天冬酶-1，并有利于caspase-1的自我蛋白水解切割，导致IL-1β和IL-18的成熟（Hoss等人。，2016）。 Inflammasome激活引发ASC二聚体的超分子寡聚化成称为“ASC-specks”或“pyroptosome”（Fernandes-Alnemri等人，2007）的大交织原纤维。 ASC-speck / ...
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