| Infectious Subviral Particle to Membrane Penetration Active Particle (ISVP-to-ISVP*) Conversion Assay for Mammalian Orthoreovirus
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] The mammalian orthoreovirus (reovirus) outer capsid undergoes a series of conformational changes prior to or during viral entry. These transitions are necessary for delivering the genome-containing core across host cell membranes. This protocol describes an in vitro assay for monitoring the transition into a membrane penetration-active form (i.e., ISVP*).
[摘要] 哺乳动物正面病毒（呼肠孤病毒）外壳在病毒进入之前或过程中经历一系列构象变化。 这些转换对于跨宿主细胞膜递送含基因组的核心是必要的。 该协议描述了用于监测向膜渗透活性形式（即，ISVP *）的转变的体外试验。
【背景】呼肠孤病毒是无包膜的双链RNA病毒，其由两个同心蛋白质壳组成：内衣壳（核心）和外衣壳（Dryden等人，1993; Zhang等人， / ，2005; Dermody et al ，2013）。在附着之后，病毒颗粒被内吞（Borsa et al。，1979; Ehrlich et al。，2004; Maginnis et al。，2006; Maginnis和宿主组织蛋白酶蛋白酶降解σ3外壳蛋白（Chang和Zweerink，1971; Silverstein等人，1972; Borsa等人，et al。 1981; Sturzenbecker等人，1987; Dermody等人，1993; Baer和Dermody，1997; Ebert等人， 2002年）。这个过程产生一个亚稳中间体，称为感染性亚病毒颗粒（ISVP），其中细胞穿透蛋白μ1被暴露（Dryden等人，1993）。 ISVPs是通过用糜蛋白酶处理纯化的病毒体而在体外产生的（Joklik，1972; ...
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| Infectious Subviral Particle-induced Hemolysis Assay for Mammalian Orthoreovirus
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] Mammalian orthoreovirus (reovirus) utilizes pore forming peptides to penetrate host cell membranes. This step is essential for delivering its genome containing core particle during viral entry. This protocol describes an in vitro assay for measuring reovirus-induced pore formation.
[摘要] 哺乳动物正面病毒（呼肠孤病毒）外壳在病毒进入之前或过程中经历一系列构象变化。 这些转换对于跨宿主细胞膜递送含基因组的核心是必要的。 该协议描述了用于监测向膜渗透活性形式（即，ISVP *）的转变的体外试验。
【背景】呼肠孤病毒是无包膜的双链RNA病毒，其由两个同心蛋白质壳组成：内衣壳（核心）和外衣壳（Dryden等人，1993; Zhang等人， / ，2005; Dermody et al ，2013）。在附着之后，病毒颗粒被内吞（Borsa et al。，1979; Ehrlich et al。，2004; Maginnis et al。，2006; Maginnis和宿主组织蛋白酶蛋白酶降解σ3外壳蛋白（Chang和Zweerink，1971; Silverstein等人，1972; Borsa等人，et al。 1981; Sturzenbecker等人，1987; Dermody等人，1993; Baer和Dermody，1997; Ebert等人， 2002年）。这个过程产生一个亚稳中间体，称为感染性亚病毒颗粒（ISVP），其中细胞穿透蛋白μ1被暴露（Dryden等人，1993）。 ISVPs是通过用糜蛋白酶处理纯化的病毒体而在体外产生的（Joklik，1972; ...
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| Conjugation Assay for Testing CRISPR-Cas Anti-plasmid Immunity in Staphylococci
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] CRISPR-Cas is a prokaryotic adaptive immune system that prevents uptake of mobile genetic elements such as bacteriophages and plasmids. Plasmid transfer between bacteria is of particular clinical concern due to increasing amounts of antibiotic resistant pathogens found in humans as a result of transfer of resistance plasmids within and between species. Testing the ability of CRISPR-Cas systems to block plasmid transfer in various conditions or with CRISPR-Cas mutants provides key insights into the functionality and mechanisms of CRISPR-Cas as well as how antibiotic resistance spreads within bacterial communities. Here, we describe a method for quantifying the impact of CRISPR-Cas on the efficiency of plasmid transfer by conjugation. While this method is presented in Staphylococcus ...
[摘要] CRISPR-Cas是一种原核适应性免疫系统，可防止移植遗传因子如噬菌体和质粒的摄取。细菌之间的质粒转移是特别临床关注的，因为由于在物种内和物种之间转移抗性质粒而在人体中发现的抗生素抗性病原体的量增加。测试CRISPR-Cas系统在各种条件下或使用CRISPR-Cas突变体阻断质粒转移的能力，为CRISPR-Cas的功能和机制以及抗菌素抗性如何在细菌群落中传播提供了重要的见解。在这里，我们描述了一种量化CRISPR-Cas对通过共轭进行质粒转移效率的影响的方法。虽然这种方法在葡萄球菌属物种中呈现，但它可以更广泛地用于任何共轭原核生物。
背景 CRISPR-Cas（聚集的，定期间隔的，短的回文重复CRISPR相关联）是几乎90％的测序古菌和约40％的细菌中发现的原核适应性免疫系统（Makarova等人，2015） ）。这些系统以序列特异性方式识别和破坏核酸侵入体（van der Oost等人，2014）。 CRISPR基因座通常包含短的DNA重复序列（长度为约35个核苷酸），其通过称为间隔区的等短的唯一序列分开，其通常来自移动遗传元件。重复序列和间隔区被转录并处理成小的CRISPR RNA（crRNA），每个指定单个靶标。 ...
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