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Polypropylene Griffin Low-Form Plastic Beakers

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 1201-4000
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In vitro Analysis of Ubiquitin-like Protein Modification in Archaea
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  The ubiquitin-like (Ubl) protein is widely distributed in Archaea and involved in many cellular pathways. A well-established method to reconstitute archaeal Ubl protein conjugation in vitro is important to better understand the process of archaeal Ubl protein modification. This protocol describes the in vitro reconstitution of Ubl protein modification and following analysis of this modification in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon serving as the model organism. [摘要]  泛素样(Ubl)蛋白广泛分布于古细菌中并参与许多细胞途径。 为了更好地理解古细菌Ub1蛋白质修饰的过程,重建体外古细菌Ubl蛋白质缀合物的完善方法是很重要的。 该协议描述了Ubl蛋白质修饰的体外重建以及在作为模型生物的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中对这种修饰进行分析。

【背景】泛素(Ub)与靶蛋白共价连接的过程被称为泛素化,其控制真核细胞中大量的细胞过程(Glickman和Ciechanover,2002; Komander和Rape,2012)。遍在蛋白化由一系列酶(包括Ub激活酶(E1),Ub结合酶(E2s)和Ub连接酶(E3s))催化。泛素化的体外重建是确定酶之间或E3与蛋白质底物之间特异性的有用测定法(Zhao等人,2012)。在古细菌中,Ubl蛋白SAMP采用Ub折叠,并且与E1样酶UbaA催化的蛋白靶标异肽连接[Maupin-Furlow,(2014)综述]。尽管E1同系物在古细菌中广泛存在,但基于一级序列比较,在大多数古细菌中未预测经典E2或E3酶。我们最近对Haloferax volcanii的研究表明甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)是Ubl蛋白质修饰(sampylation)与UbaA一起在体内温和的氧化条件下和< (体外)(fu="">

Nuclei Isolation from Nematode Ascaris
Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract]  Preparing nuclei is necessary in a variety of experimental paradigms to study nuclear processes. In this protocol, we describe a method for rapid preparation of large number of relatively pure nuclei from Ascaris embryos or tissues that are ready to be used for further experiments such as chromatin isolation and ChIP-seq, nuclear RNA analyses, or preparation of nuclear extracts (Kang et al., 2016; Wang et al., 2016). [摘要]  在各种实验范例中准备核是必要的,以研究核过程。在本协议中,我们描述了一种从准备用于进一步实验(如染色质分离和ChIP-seq,核RNA)的蛔虫胚胎或组织快速制备大量相对纯的核的方法分析或准备核提取物(Kang等人,2016; Wang等人,2016)。

背景 核分离通常是研究核事件的分子和生物化学方面的第一步。已经开发了几种方法来分离来自不同组织和细胞类型的细胞核。然而,除了C以外的线虫的细胞核分离方案很少。已经描述了线索,(Ooi等人,2010; Zanin等人,2011; Haenni等人,2012, )。已经使用寄生线虫蛔虫的胚胎来制备用于体外无细胞系统的各种提取物(Cohen等人,2004) ; Lall等人,2004)。然而,这些提取物通常是全细胞提取物。在这里,我们描述了从线虫蛔虫制备细胞核的方法。

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