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LSM 510 Laser Scanning Microscope

Zeiss LSM 510-META共聚焦激光扫描显微镜

Company: ZEISS
Catalog#: LSM 510
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Other protocol()

Isolation and Infection of Drosophila Primary Hemocytes
Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract]  Phagocytosis of invading pathogens and their subsequent clearance in lysosomes is important for organismal fitness. We have devised the following protocol to extract phagocytic hemocytes from wild-type and mutant Drosophila larvae and infect the isolated hemocytes with GFP-labeled E. coli to measure the rate of phagocytosis and degradation within individual hemocytes over time. [摘要]  入侵病原体的吞噬作用及其随后在溶酶体中的清除对于有机体适应性是重要的。我们设计了以下方案从野生型和突变型果蝇幼虫中提取吞噬性血细胞,并用GFP标记的E感染分离的血细胞。大肠杆菌以测量个体血细胞内吞噬和降解的速度。

背景 下面描述的实验可用于研究吞噬体的生物发生,成熟和向溶酶体的递送。细菌积累已经在免疫受损的果蝇的背景下得到充分的研究,其具有IMD或Toll信号传导中的缺陷,并导致抗微生物肽的表达降低(例如,Lemaitre和Hoffmann ,2007; Kleino和Silverman,2014)。细菌感染的细胞响应在果蝇中的研究较少,大多数研究集中于干扰血细胞对细菌的最初吞噬吞噬的突变(Kocks等人,2005年) ;帕森斯和福利,2016)。这种细菌摄取是直接使用FACS分析进行测量(Tirouvanziam等人,2004)。然而,对于吞噬体成熟的详细分析,我们发现检查附着在玻璃盖板上的个体血细胞是有利的(Akbar等人,2011; Rahman等人。 ,2012; Akbar等人,2016),因为这个过程为我们研究吞噬体成熟提供了时间和空间分辨率的最佳组合。

3D Stroma Invasion Assay
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract]  We have developed a 3D co-culture system composed of fibroblasts and colorectal cancer cells that enables us to study the desmoplastic reaction. This method also enables us to study the influence of the desmoplastic reaction on the migration of colorectal cancer cells through the surrounding stroma. This protocol has been previously published (Coulson-Thomas et al., 2011) and is described here in more detail. [摘要]  我们开发了一种由成纤维细胞和结肠直肠癌细胞组成的3D共培养系统,使我们能够研究脱发反应。这种方法还使我们能够研究脱发反应对结肠直肠癌细胞通过周围基质的迁移的影响。以前已经公布了该协议(Coulson-Thomas等人,2011),并且在此更详细地描述。

背景 癌症的进展依赖于癌细胞和周围细胞如成纤维细胞,炎性细胞和内皮细胞之间的复杂的串扰,其形成癌症微环境。成纤维细胞是主要的细胞外基质产生细胞并且负责组织的结构形成。肿瘤周围的成纤维细胞被癌细胞“激活”成肿瘤相关成纤维细胞(TAFs),并在肿瘤发生和转移中发挥关键作用。在一些癌症中,TAF上调细胞外基质表达,产生一种主要由胶原纤维和蛋白多糖组成的无组织基质,其影响癌细胞增殖,迁移和扩散。这被称为脱发反应,并且在癌细胞生长期间,不同的肿瘤可能表现出各种等级的发育不良。

Assessment of Cellular Redox State Using NAD(P)H Fluorescence Intensity and Lifetime
Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract]  NADH and NADPH are redox cofactors, primarily involved in catabolic and anabolic metabolic processes respectively. In addition, NADPH plays an important role in cellular antioxidant defence. In live cells and tissues, the intensity of their spectrally-identical autofluorescence, termed NAD(P)H, can be used to probe the mitochondrial redox state, while their distinct enzyme-binding characteristics can be used to separate their relative contributions to the total NAD(P)H intensity using fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM). These protocols allow differences in metabolism to be detected between cell types and altered physiological and pathological states. [摘要]  NADH和NADPH分别是分解代谢和合成代谢过程的氧化还原辅因子。此外,NADPH在细胞抗氧化防御中起着重要作用。在活细胞和组织中,其光谱相同的自发荧光(称为NAD(P)H)的强度可用于探测线粒体氧化还原状态,而其不同的酶结合特征可用于将其相对贡献与总共分离使用荧光寿命成像显微镜(FLIM)的NAD(P)H强度。这些方案允许在细胞类型和改变的生理和病理状态之间检测代谢的差异。

背景 氧化还原辅因子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)及其磷酸化对应物NADPH的还原形式本质上是荧光的,两者都吸收波长为340(±30)nm并在460(±50)nm处发射的光(Patterson等人。,2000)。这些光谱特征在氧化成NAD(上标+)或NADP(superson),(2007))时损失。单独的NAD和NADP池的氧化还原平衡决定了对比的代谢过程(Ying,2008),如图1所示。NAD作为电子受体,用于通过三羧酸氧化线粒体中的糖,脂质和氨基酸底物(TCA)循环,并作为内线粒体膜(IMM)上的电子传递链(ETC)的电子供体,促使将质子泵送到膜间隙中,作为合成三磷酸腺苷(ATP)的电源,通过F 1 F 0 O 3 ATP合成酶(Osellame等人,2012)。因此,线粒体中NADH与NAD + 的平衡反映了TCA循环与ETC活性的平衡。 ...

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