| Efficient Transient Gene Knock-down in Tobacco Plants Using Carbon Nanocarriers
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Gene knock-down in plants is a useful approach to study genotype-phenotype relationships, render disease resistance to crops, and enable efficient biosynthesis of molecules in plants. Small interfering RNA (siRNA)-mediated gene silencing is one of the most common ways to achieve gene knock-down in plants. Traditionally, siRNA is delivered into intact plant cells by coding the siRNA sequences into DNA vectors, which are then delivered through viral and/or bacterial methods. In this protocol, we provide an alternative direct delivery method of siRNA molecules into intact plant cells for efficient transient gene knock-down in model tobacco plant, Nicotiana benthamiana, leaves. Our approach uses one dimensional carbon-based nanomaterials, single-walled carbon nanotubes (SWNTs), to ...
[摘要] [摘要]植物基因敲低是研究基因型与表型关系，提高作物对病害的抵抗力以及实现植物分子高效生物合成的有用方法。小干扰RNA（siRNA）介导的基因沉默是在植物中实现基因敲低的最常见方法之一。传统上，通过将siRNA序列编码到DNA载体中，将siRNA传递到完整的植物细胞中，然后通过病毒和/或细菌方法传递。在这个协议中，我们提供的siRNA分子的替代直接递送方法为完整的植物细胞的高效瞬时根Ë击倒在模型的烟草植物，烟草本塞姆氏烟草，叶子。我们的方法使用一维碳基纳米材料，单壁碳纳米管（SWNTs）来传递siRNA，而不依赖于病毒/细菌的传递。我们方法的独特优势在于：i ）不需要对siRNA序列进行DNA编码； ii）与非生物方法相比，这种非生物方法可在更广泛的植物物种中起作用，并且iii）使用非生物递送时，调节并发症更少方法，其中基因沉默是瞬时的，而无需对植物基因组进行永久性修饰。
图形摘要：
图形抽象标题
[背景技术[ 0002 ]在1990年代初，植物研究人员研究矮牵牛花的着色发现了通过RNA干扰（RNAi）引起的基因沉默（Van der ...
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| Studying the Role of Microglia in Neurodegeneration and Axonal Regeneration in the Murine Visual System
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Microglia reside in the central nervous system (CNS) and are involved in the maintenance of the physiologic state. They constantly survey their environment for pathologic alterations associated with injury or diseases. For decades, researchers have investigated the role of microglia under different pathologic conditions, using approaches aiming to inhibit or eliminate these phagocytic cells. However, until recently, methods have failed to achieve complete depletion. Moreover, treatments often affected other cells, making unequivocal conclusions from these studies difficult. Recently, we have shown that inhibition of colony stimulating factor 1 receptor (CSF1R) by oral treatment with PLX5622 containing chow enables complete depletion of retinal microglia and almost complete microglia ...
[摘要] 小胶质细胞存在于中枢神经系统（CNS）中，并参与维持生理状态。他们不断调查他们的环境，以寻找与受伤或疾病相关的病理改变。几十年来，研究人员使用旨在抑制或消除这些吞噬细胞的方法，研究了小胶质细胞在不同病理条件下的作用。然而，直到最近，方法未能实现完全耗尽。此外，治疗通常会影响其他细胞，因此难以从这些研究中得出明确的结论。最近，我们已经表明，通过用含有食物的PLX5622口服治疗抑制集落刺激因子1受体（CSF1R）能够完全消除视网膜小胶质细胞并且几乎完全消除视神经中的小胶质细胞，而不影响外周巨噬细胞或其他细胞。使用这种方法，我们研究了小胶质细胞在视网膜神经保护中的作用以及在不同条件下受损视神经中的轴突再生。因此，这里提出的这种有效，可靠和易于使用的方案将使研究人员能够明确地研究小胶质细胞对神经变性和轴突再生的贡献。该方案还可以容易地扩展到视觉系统中的急性和慢性损伤或疾病的其他范例。
【背景】 小胶质细胞是中枢神经系统（CNS）的常驻免疫细胞，其持续扫描其环境以进行病理改变（Nimmerjahn et al。，2005）。在检测到这种情况后，小胶质细胞转变为活化状态并向其进行不同任务的来源迁移（Kreutzberg，1996; Davalos et ...
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| Immunoprecipitation of Cell Surface Proteins from Gram-negative Bacteria
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] The meningococcus (Neisseria meningitidis) remains an important threat to human health worldwide. This Gram-negative bacterium causes elevated disabilities and mortality in infected individuals. Despite several available vaccines, currently there is no universal vaccine against all circulating meningococcal strains (Vogel et al., 2013). Herein, we describe a new protocol that is capable of identifying only cell surface exposed proteins that play a role in immunity, providing this research field with a more straightforward approach to identify novel vaccine targets. Even though N. meningitidis is used as a model in the protocol herein described, this protocol can be used for any Gram-negative bacteria provided modifications and optimizations are carried out to ...
[摘要] 脑膜炎球菌（脑膜炎奈瑟氏球菌）仍然是全球人类健康的重大威胁。这种革兰氏阴性细菌导致感染个体的残疾和死亡率升高。尽管有几种可用的疫苗，目前还没有针对所有循环脑膜炎球菌菌株的通用疫苗（Vogel等人，2013）。在这里，我们描述了一种能够识别仅在细胞表面暴露的蛋白质在免疫中发挥作用的新方案，为该研究领域提供了一种更直接的方法来鉴定新的疫苗靶标。即使使用脑膜炎奈瑟氏球菌作为本文所述方案中的模型，该方案可用于任何革兰氏阴性细菌，提供修饰和优化以使其适应不同的细菌和疾病特征（例如薄膜脆性，生长方法，血清抗体水平，等等）。
背景 尝试开发针对N型的新型疫苗。脑膜炎脑膜炎常常依赖于2D SDS-PAGE（二维十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳）和蛋白质印迹，随后MS（质谱）（Wheeler等人，2007））。然而，这种方法采用全细胞裂解物，鉴定出不具有疫苗潜力的大量蛋白质（Mendum等人，2009）。因此，我们旨在开发一种能够鉴别可能在免疫中起重要作用的细胞表面暴露蛋白质的方法。简言之，我们的方案包括生长感兴趣的病原体，用免疫个体的血清免疫沉淀表面抗原，并通过液相色谱 - ...
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