| Analyzing the Properties of Murine Intestinal Mucins by Electrophoresis and Histology
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Specialized secretory cells known as goblet cells in the intestine and respiratory epithelium are responsible for the secretion of mucins. Mucins are large heavily glycosylated proteins and typically have a molecular mass higher than 106 Da. These large proteins are densely substituted with short glycan chains, which have many important functional roles including determining the hydration and viscoelastic properties of the mucus gel that lines and protects the intestinal epithelium. In this protocol, we comprehensively describe the method for extraction of murine mucus and its analysis by agarose gel electrophoresis. Additionally we describe the use of High Iron Diamine-Alcian Blue, Periodic Acid Schiff’s-Alcian Blue and immune–staining methods to identify and differentiate ...
[摘要] 在肠和呼吸上皮中称为杯状细胞的专门分泌细胞负责粘蛋白的分泌。 粘蛋白是大的重糖基化蛋白质，通常具有高于10μM的分子量。 这些大蛋白质被短聚糖链密集取代，其具有许多重要的功能作用，包括测定粘液凝胶的水合和粘弹性质，其保护肠上皮。 在该方案中，我们全面地描述了通过琼脂糖凝胶电泳提取小鼠粘液的方法及其分析。 此外，我们描述了使用高铁二胺 - 阿尔星蓝，周期酸席夫氏 - 阿尔辛蓝和免疫染色方法来鉴别和区分这些粘蛋白糖蛋白上糖基化的不同状态，特别是侧重于硫酸化和唾液酸化。
【背景】一层粘液保护肠上皮，主要由粘蛋白，水，蛋白质和无机盐组成。粘液屏障的粘性和凝胶状特性使其能够物理保护和润滑粘膜，主要由粘蛋白赋予。粘蛋白是大的重糖基化蛋白质，通常具有高于10μM的分子量。然而，粘蛋白主要用O-聚糖糖装饰，其占分子量的80％。不同的位点特异性和粘蛋白特异性糖基化模式影响粘蛋白和粘液凝胶的性质。众所周知，粘蛋白糖基化在感染和疾病中发生改变（Arike等人，2017; ...
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| Mimicking Angiogenesis in vitro: Three-dimensional Co-culture of Vascular Endothelial Cells and Perivascular Cells in Collagen Type I Gels
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Angiogenesis defines the process of formation of new vascular structures form existing blood vessels, involved during development, repair processes like wound healing but also linked to pathological changes. During angiogenic processes, endothelial cells build a vascular network and recruit perivascular cells to form mature, stable vessels. Endothelial cells and perivascular cells secret and assemble a vascular basement membrane and interact via close cell-cell contacts. To mimic these processes in vitro we have developed a versatile three-dimensional culture system where perivascular cells (PVC) are co-cultured with human umbilical cord vascular endothelial cells (HUVEC) in a collagen type I gel. This co-culture system can be used to determine biochemical and cellular processes ...
[摘要] 血管发生定义了形成现有血管的新血管结构的形成过程，涉及发育过程中的修复过程，如伤口愈合，还与病理变化有关。 在血管生成过程中，内皮细胞建立血管网络并招募血管周围细胞以形成成熟稳定的血管。 内皮细胞和血管周围细胞秘密并组装血管基底膜，并通过细胞间接触进行相互作用。 为了体外模拟这些过程，我们开发了一种通用的三维培养系统，其中血管周围细胞（PVC）与胶原I型凝胶中的人脐带血管内皮细胞（HUVEC）共培养。 这种共培养系统可用于通过广泛的分析选项来确定新生血管生成事件期间的生物化学和细胞过程。
【背景】内皮细胞和血管周围细胞之间的协调相互作用对于根据给定组织内的局部需要形成稳定的血管网是非常重要的。多个分子组分有助于相互作用，但仍然很少了解。需要各种生长因子来吸引内皮细胞到低氧浓度的位点，并建立新的血管，然后被血管周围细胞覆盖。两种细胞类型相互作用以分泌特定的细胞外基质并稳定新形成的血管。在过去已经建立了多个测定法来分析二维基质胶底物上的血管细胞相互作用和血管样网络形成，但是这些测定在三维细胞内提供关于血管内血管周围细胞相互作用和血管基底膜形成的初始步骤的信息是有限的维度微环境。此外，缺乏适合于培养实验的良好表征的血管周围细胞。
我们以前分离出具有血管周围特征的细胞，因为它们表达周细胞特异性标记，产生和分泌细胞外基质蛋白并在体内刺激血管生成过程（Brachvogel等，2005和2007）。这些细胞用于与人脐静脉内皮细胞建立共培养系统，并研究三维微环境中两种细胞类型相互作用后新生血管发生的关键步骤（Pitzler等，2016; ...
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