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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Eukaryotic nuclear DNA wraps around histone proteins to form a nucleosome, a basic unit of chromatin. Posttranslational modification of histones plays an important role in gene regulation and chromosome duplication. Some modifications are quite stable to be an epigenetic memory, and others exhibit rapid turnover or fluctuate during the cell cycle. Histone H4 Lys20 monomethylation (H4K20me1) has been shown to be involved in chromosome condensation, segregation, replication and repair. H4K20 methylation is controlled through a few methyltransferases, PR-Set7/Set8, SUV420H1, and SUV420H2, and a demethylase, PHF8. In cycling cells, the level of H4K20me1 increases during G2 and M phases and decreases during G1 phase. To monitor the local concentration and global fluctuation of histone ...
[摘要] 真核核DNA包裹组蛋白，形成核小体，是染色质的基本单位。组蛋白的翻译后修饰在基因调控和染色体重复中起重要作用。一些修饰是相当稳定的，作为表观遗传记忆，其他修饰在细胞周期中表现出快速更替或波动。组蛋白H4 Lys20单甲基化（H4K20me1）已显示参与染色体凝聚，分离，复制和修复。通过几种甲基转移酶PR-Set7 / Set8，SUV420H1和SUV420H2以及脱甲基酶PHF8控制H4K20甲基化。在循环细胞中，H4K20me1的水平在G2期和M期增加，G1期下降。为了监测活细胞中组蛋白修饰的局部浓度和全局波动，我们开发了一种基因编码的探针，称为薄荷素（修饰特异性细胞内抗体; Sato等人，2013和2016）。通过测量核细胞与细胞质的强度比，可以监测单个细胞中H4K20me1的相对水平。该详细方案允许甲基转移酶对基于HatoK等人的质粒H4K20me1-mintbody活性细胞中H4K20me1水平的影响进行半定量分析（2016）。
背景 ...
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Here we describe a protocol that enables to automatically perform time-lapse imaging of growing root tips for several hours. Plants roots expressing fluorescent proteins or stained with dyes are imaged while they grow using automatic movement of the microscope stage that compensates for root growth and allows to follow a given region of the root over time. The protocol makes possible the image acquisition of multiple growing root tips, therefore increasing the number of recorded mitotic events in a given experiment. The protocol also allows the visualization of more than one fluorescent protein or dye simultaneously, using multiple channel acquisition. We particularly focus on imaging of cytokinesis in Arabidopsis root tip meristem, but this protocol is also suitable to follow ...
[摘要] 在这里，我们描述一个协议，可以自动执行增长根尖的延时成像几个小时。表达荧光蛋白或用染料染色的植物根据显影阶段的自动移动而成像，其补偿根生长，并允许随着时间跟随根部的给定区域。该协议使图像采集多个生长根尖成为可能，因此增加了给定实验中记录的有丝分裂事件的数量。该协议还允许多个荧光蛋白或染料同时显示，使用多通道采集。我们特别关注在拟南芥根尖分生组织中细胞分裂的成像，但是这种方案也适用于在各种植物物种中追随根毛发生长，花粉管生长和其他根部区域。也可以修改为自动跟踪非植物结构的根尖增长。
细胞因子是细胞分裂的最后一步，当母细胞细胞质在两个子细胞之间分配（Lipka等人，2015）时。在植物中，通过分裂平面中的细胞板的离心扩张实现，其最终成为经历有丝分裂的细胞之间的新合成的细胞壁（Buschmann和Zachgo，2016;Müller和Jürgens，2016）。植物细胞嵌入僵硬的细胞壁，不能迁移。因此细胞分裂与伸长的取向对于器官形态发生至关重要。根分生组织是研究细胞分裂的一个很好的模型，因为它们容易适用于显微技术，而不需要解剖。然而，进行细胞分裂的根长度增长，因此需要随时间手动调整观察场。该协议允许容易地延迟细胞分裂成像和其他细胞过程。
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