| A Simple Microplate Assay for Reactive Oxygen Species Generation and Rapid Cellular Protein Normalization
|
|
Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] 2',7'-dichlorofluorescein (DCF) and derivatives are commonly used as fluorescent indicators of a broad spectrum of reactive oxygen species (ROS) generation in cell-based assays. However, there are numerous challenges inherent to the utilization of DCF probes for intracellular microscopic analysis, including bleaching and probe efflux. Plate spectroscopy is comparatively simple and scalable compared to microscopy or flow cytometry-based acquisition, however is often subject to artefacts, including those introduced by thermal gradients and normalization methods. In this protocol we demonstrate a simple and sensitive plate spectrometry-based protocol utilizing the probes H2DCFDA and sulforhodamine B. The truncated sulforhodamine B assay (SRB) for cellular protein allows for a ...
[摘要] [摘要] 2'，7'-二氯荧光素（DCF）及其衍生物在基于细胞的测定中通常用作产生广泛活性氧（ROS）的荧光指示剂。然而，利用DCF探针进行细胞内显微分析存在许多固有的挑战，包括光稳定性和探针外排。与基于显微镜或基于流式细胞仪的采集相比，板式光谱仪相对简单且可扩展，但是通常会受到伪影的影响，包括通过热梯度和归一化方法引入的伪影。在此方案中，我们展示了一种使用探针H 2 DCFDA和磺基若丹明B的简单而灵敏的基于板光谱的方案。细胞蛋白的快速磺基若丹明B检测（SRB）可以对总细胞群体进行稳定的终点测量，同时还可以保留形态，可以与任何其他检测结合或并行进行以对细胞质量进行归一化，并通过显微镜评分进行补充细胞数和核数。氧化应激和归一化方法可能会增强研究细胞分化，应激或毒性的研究领域。。
图形概要：
ROS生成和细胞蛋白定量的图形概述
关键词：二氯，丹明，DCF，SRB，氧化应激，活性氧，测定
[背景]微孔板检测提供比基于显微镜的分析一个显著的优势对于吞吐量的分析设备，优化和分析时间成本。荧光探针（如2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸盐（H 2 ...
|
|
|
| In vivo Mouse Mammary Gland Formation
|
|
Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] For years, the mammary gland serves as a perfect example to study the self-renew and differentiation of adult stem cells, and the regulatory mechanisms of these processes as well. To assess the function of given genes and/or other factors on stemness of mammary cells, several In vitro assays were developed, such as mammospheres formation assay, detection of stem cell markers by mRNA expression or flow cytometry and so on. However, the capacity of reconstruction of whole mount in the cleared fat pad of recipient female mice is a golden standard to estimate the stemness of the cells. Here we described a step-by-step protocol for in vivo mammary gland formation assay, including preparation of “cleared” recipients and mammary cells for implantation, the surgery process and ...
[摘要] [摘要 ] 多年来，乳腺一直是研究成体干细胞的自我更新和分化以及这些过程的调控机制的完美例证。为了评估给定的基因和/或其他因素对乳腺细胞的干性，有几个函数体外测定法开发出来，如微球体由mRNA表达形成试验，干细胞标志物的检测或流式细胞术等。然而，在雌性小鼠清除的脂肪垫中整个坐骨的重建能力是估计细胞干性的黄金标准。在这里，我们描述了体内的分步操作方案 乳腺形成测定，包括准备“清除”的受体和用于植入的乳腺细胞，手术过程以及如何评估实验结果。结合通过基因编辑和/或药物处理对乳腺细胞的操作，该方案在乳腺干细胞和乳腺发育的研究中可能非常有用。
[背景 ] 作为哺乳动物最典型的器官之一，乳腺（MG）是外分泌腺，负责泌乳。MG的发育受某些性激素的控制，这些激素的水平精确地调节了MG在不同发育阶段的结构，细胞组成和功能变化（Henigighausen and Robinson，2005）。许多遗传和环境因素都参与了乳腺干细胞的调控和MG的发育。为了研究这些因素的功能和机理，已经开发了几种方法，特别是用于评估乳腺细胞的干性。先前的研究表明，只有MG的基底细胞而非管腔细胞能够在受体雌性小鼠清除的脂肪垫中重建上皮树，这表明乳腺干细胞仅存在于基底谱系中（Van Keymeulen 等，2011）。 ）。后来，包括我们在内的许多研究发现了乳腺干细胞的几种标志物（Prater ...
|
|
|
| BMV Propagation, Extraction and Purification Using Chromatographic Methods
|
|
Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Brome mosaic virus (BMV) is a well-known plant virus representing single-stranded RNA (ssRNA) positive-sense viruses. It has been widely used as a model in multiple studies concerning plant virus biology, epidemiology and the application of viral capsids in nanotechnology. Herein, we describe a method for BMV purification based on ion-exchange and size-exclusion chromatography. The presented method is of similar efficiency to previously described protocols relying on differential centrifugation and can easily be scaled up. The resulting BMV capsids are stable and monodisperse and can be used for further applications.
[摘要] 雀麦花叶病毒（BMV）是众所周知的植物病毒，代表单链RNA（ssRNA）正义病毒。 它已被广泛用作植物病毒生物学，流行病学和病毒衣壳在纳米技术中的应用的多项研究中的模型。 在本文中，我们描述了基于离子交换和尺寸排阻色谱的BMV纯化方法。 所提出的方法与先前描述的依赖于差速离心的方案具有相似的效率，并且可以容易地按比例放大。 得到的BMV衣壳是稳定的并且是单分散的，并且可以用于进一步的应用。
【背景】纳米技术要克服的关键挑战之一是制定有效的和组织特异性的药物递送方法。植物病毒和病毒样颗粒（VLP）具有生物相容性和可生物降解性，不含对人类或动物健康有害的病原体，是合成药物载体的安全替代品，通常会激活免疫系统的不良反应或积聚在免疫系统中。身体到毒性水平。最后，病毒衣壳的生产相对便宜且快速（Ren et al。，2007; Arcangeli et al。，2014）。
Bromoviridae 家族的雀麦花叶病毒（BMV）是用作纳米颗粒载体的良好候选物，因为它显示出所有上述特征并且是研究最多的植物病毒之一（Figlerowicz，2000; Alejska et al。，2005; Urbanowicz et al。，2005; Wierzchoslawski et al。，2006; Kao vet al。 ...
|
|
|