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Date:
2017-04-20
[Abstract] The RNA exosome complex plays a central role in RNA processing and regulated turnover. Present both in cytoplasm and nucleus, the exosome functions through associations with ribonucleases and various adapter proteins (reviewed in [Kilchert et al., 2016]). The RNA exosome-associated EXOSC10 protein is a distributive, 3’-5’ exoribonuclease. The following protocol describes an approach to monitor the ribonucleolytic activity of affinity-purified EXOSC10-containing RNA exosomes, originating from HEK-293 cells, as reported in (Domanski et al., 2016) and further detailed in the companion bio-protocol to this one (Domanski and LaCava, 2017).
[摘要] RNA外植体复合物在RNA加工和调节营养中起核心作用。在细胞质和细胞核中存在，外来体通过与核糖核酸酶和各种衔接蛋白的关联起作用（参见[Kilchert等人，2016]）。 RNA外植体相关的EXOSC10蛋白是分布的3'-5'外核糖核酸酶。以下方案描述了监测源自HEK-293细胞的亲和纯化含EXOSC10的RNA外来体的核糖核酸裂解活性的方法，如（Domanski等人，2016）所报道的，并进一步详细描述这个配套生物协议（Domanski和LaCava，2017）。
在我们以前的工作中，我们在四环素诱导型CMV启动子（HEK-293 Flp-In T-REx-Thermo）的控制下，建立了表达C末端3xFLAG标记的外来体成分EXOSC10（RRP6）的同基因HEK-293细胞系费雪科学）。该系统允许我们以与内源WT蛋白质相当的水平表达标记的EXOSC10蛋白质，并且使用磁性抗FLAG亲和介质和来源于冷冻细胞粉末的蛋白质提取物来研究外来体纯化方案（Domanski等， / ...
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