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Date:
2017-04-20
[Abstract] Size exclusion chromatography (SEC) or gel filtration is a hydrodynamic technique that separates molecules in solution as a function of their size and shape. In the case of proteins, the hydrodynamic value that can be experimentally derived is the Stokes radius (Rs), which is the radius of a sphere with the same hydrodynamic properties (i.e., frictional coefficient) as the biomolecule. Determination of Rs by SEC has been widely used to monitor conformational changes induced by the binding of calcium (Ca2+) to many Ca2+-sensor proteins. For this class of proteins, SEC separation is based not just on the variation in protein size following Ca2+ binding, but likely arises from changes in the hydration shell structure.
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[摘要] 尺寸排阻色谱法（SEC）或凝胶过滤是一种流体动力学技术，它将溶液中的分子作为其尺寸和形状的函数。在蛋白质的情况下，可以通过实验得出的流体动力学值是斯托克斯半径（R s），它是具有相同流体力学性质的球体的半径（即， >摩擦系数）作为生物分子。通过SEC测定R s已经被广泛用于监测由钙（Ca 2+）与许多Ca 2+连接引起的构象变化传感器蛋白。对于这类蛋白质，SEC分离不仅基于Ca 2 + 结合后的蛋白质尺寸变化，而且可能来自水合壳结构的变化。
该方案旨在使用快速蛋白质液相色谱（FPLC）系统对预填充柱进行凝胶过滤实验，以确定蛋白质的R 1，其中一些适用于Ca 2 + 传感器蛋白。
凝胶过滤基于其相对的能力分离不同大小和形状的分子，以穿透具有明确孔径的多孔珠床，其识别分馏范围。大于完全排除进入孔隙的分馏范围的分子快速流过色谱柱，首先以空间体积（V 0 O）（其为支持颗粒外的间隙体积）洗脱。能够扩散到珠的孔中的小于分级范围的分子具有可用于流动相的总体积，因此它们更缓慢地移动通过床并最后洗脱。具有中等维度的分子将以包含在流动相可利用的空隙体积和总体积之间的洗脱体积（V e e e e）被洗脱（分子越小，其进入孔隙越大矩阵，因此其V e e越大）。
蛋白质的分子量可以通过比较其洗脱体积参数K ...
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