| Ex vivo Follicle Rupture and in situ Zymography in Drosophila
|
|
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Ovulation, the process of releasing a mature oocyte from the ovary, is crucial for animal reproduction. In order for the process of ovulation to occur, a follicle must be fully matured and signaled to rupture from the ovary. During follicle rupture in both mammals and Drosophila, somatic follicle cells are enzymatically degraded to allow the oocyte to be liberated from the follicle. Here, we describe a detailed protocol of our newly developed ex vivo follicle rupture assay in Drosophila, which represents a first assay allowing direct quantification of follicles’ capacity to respond to ovulation stimuli and rupture. This assay can be modified to stimulate rupture with other reagents (for example, ionomycin) or to query enzymatic activity (in situ ...
[摘要] 排卵是从卵巢释放成熟卵母细胞的过程，对动物繁殖至关重要。 为了发生排卵过程，卵泡必须完全成熟并发信号通知卵巢破裂。 在哺乳动物和果蝇卵泡破裂期间，体细胞卵泡细胞被酶促降解以允许卵母细胞从卵泡释放。 在此，我们描述了我们在果蝇中新开发的离体卵泡破裂测定的详细方案，其代表允许直接量化卵泡响应排卵刺激的能力的第一测定 并破裂。 可以修改该测定以刺激用其他试剂（例如离子霉素）破裂或查询酶活性（原位酶谱法）。 此外，这种检测方法允许基因或药理学筛选鉴定果蝇中调节卵泡破裂的基因或小分子。
【背景】由于在直接显示和定量排卵事件方面的技术挑战，对果蝇中的排卵的研究在很大程度上受到限制。在过去的几十年中，多种间接方法已经有了局限性。研究果蝇排卵的第一种方法是推动女性的腹部，并记录是否有卵子从产卵器排出（Aigaki et al。，1991; Lee <等人，2003）。这种方法是粗略估计子宫内是否有排卵的卵子。第二种常见的测定方法是测量雌蝇交配后的产蛋能力。产卵过程复杂，涉及卵泡的发育和成熟，排卵，排卵通过输卵管的运输，选择合适的产卵基质和产卵（spradling，1993; bloch="" qazi等人。，2003）。如果这些过程中的任何一个受到损害，则会导致产蛋率有缺陷。排卵受损的另一个指标是卵子保留表型（monastirioti等人，1996;="" monastirioti，2003;="" cole等人，2005）。如果女性卵巢内有过多的成熟卵泡，则表示无排卵表型。然而，这可以直接由排卵缺陷引起，或间接由产卵过程中排卵下游的缺陷引起。另一方面，缺乏保留表型并不一定意味着缺乏排卵缺陷。用于研究排卵的第四种测定方法是检查生殖道中是否存在卵子（heifetz="" et="" al。2000，lee="" et="" al。2009;="" lim="" 等人，，2014）。该测定法中的变化范围从量化排卵率的比例通过雌性在其下部输卵管/常见输卵管/子宫交配后的雌性百分比来定量（lee等人，2009;="" lim等人，="" ，2014年），以检查这些分开的区域随着时间的推移而分布的鸡蛋（heifetz="" et="" al。="" 2000="">）。然而，这些测定中的每一个都可能受卵子发生，排卵和产卵速度的影响。为了说明每个单独测定的所有可能的缺点，我们最近将雌性生殖道中的卵子保留测定，产蛋测定和卵子定位结合起来以估计卵子排卵的平均时间（排卵时间; Sun和Spradling，2013年; Deady et al。，2015年和2017年; Deady和Sun，2015年; ...
|
|
|
| Expression and Analysis of Flow-regulated Ion Channels in Xenopus Oocytes
|
|
Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Mechanically-gated ion channels play key roles in mechanotransduction, a process that translates physical forces into biological signals. Epithelial and endothelial cells are exposed to laminar shear stress (LSS), a tangential force exerted by flowing fluids against the wall of vessels and epithelia. The protocol outlined herein has been used to examine the response of ion channels expressed in Xenopus oocytes to LSS (Hoger et al., 2002; Carattino et al., 2004; Shi et al., 2006). The Xenopus oocyte is a reliable system that allows for the expression and chemical modification of ion channels and regulatory proteins (George et al., 1989; Palmer et al., 1990; Sheng et al., 2001; Carattino et al., 2003). ...
[摘要] 机械门控离子通道在机械传导中起关键作用，这是将物理力量转化为生物信号的过程。 上皮细胞和内皮细胞暴露于层流剪切应力（LSS），这是通过流体流向血管壁和上皮细胞壁所施加的切向力。 本文概述的方案已用于检查在非洲爪蟾卵母细胞中表达的离子通道对LSS的反应（Hoger等，2002; Carattino等，2004; Shi等，2006）。 非洲爪蟾卵母细胞是允许离子通道和调节蛋白的表达和化学修饰的可靠系统（George等，1989; Palmer等，1990; Sheng等，2001; Carattino等，2003）。 因此，该技术适用于研究允许流激活通道响应LSS的分子机制。
【背景】排列血管的泌尿道和内皮细胞的上皮细胞经受移动流体引起的机械力。这些力是层流剪切应力（LSS），与管状结构壁相切的摩擦力，以及垂直于流动方向的周向拉伸。令人信服的证据表明，LSS是响应肾和血管管状结构的流动变化而观察到的生理反应的主要决定因素（Satlin等，2001; Liu等，2003; Weinbaum等，2010） 。在这些设置中，离子通道具有将流体剪切应力传递到生物信号中的重要作用（Ranade等，2015）。例如，在肾的远端肾单位中，Na +再吸收和K ...
|
|
|