| Ex vivo Culture of Adult Mouse Antral Glands
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] The tri-dimensional culture, initially described by Sato et al. (2009) in order to isolate and characterize epithelial stem cells of the adult small intestine, has been subsequently adapted to many different organs. One of the first examples was the isolation and culture of antral stem cells by Barker et al. (2010), who efficiently generated organoids that recapitulate the mature pyloric epithelium in vitro. This ex vivo approach is suitable and promising to study gastric function in homeostasis as well as in disease. We have adapted Barker’s protocol to compare homeostatic and regenerating tissues and here, we meticulously describe, step by step, the isolation and culture of antral glands as well as the isolation of single cells from antral glands that ...
[摘要] 为了分离和表征成年小肠的上皮干细胞，最初由Sato等人（2009）描述的三维培养物已经随后适应于许多不同的器官。其中一个例子是Barker等人（2010）分离和培养窦性干细胞，他们有效地产生了在体外重现成熟幽门上皮的组织细胞。这种“离体”方法是适合的，并且有希望研究体内平衡和疾病中的胃功能。我们已经调整了Barker的方案来比较稳态和再生组织，这里，我们一步一步地仔细地描述了窦腺的分离和培养，以及从细胞分选后可能用于培养的窦腺中分离单细胞一个例子（Fernandez Vallone等人，2016）。
背景来自腺体的小鼠成体干细胞可以在3D matrigel中离体生长，作为“迷你腺体”无限期（Barker等人，2010） 。与EGF，Noggin和R-spondin 1存在下生长的小鼠成年小肠的干细胞相比，胃干细胞需要进一步补充Fgf10，胃泌素，Wnt3a和更高浓度的R-螺旋菌素1（称为作为ENRFGW）获得生产性文化。直到最近，在干细胞消融后，在离体培养系统中成体再生窦腺是否生长，如果是这样，仍然是未知的。使用本方案，证明了内源性和再生的腺体在接种时不会类似地生长并且表现出不同的生长培养要求。
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| Ex vivo Culture of Fetal Mouse Gastric Epithelial Progenitors
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Isolation and tridimensional culture of murine fetal progenitors from the digestive tract represents a new approach to study the nature and the biological characteristics of these epithelial cells that are present before the onset of the cytodifferentiation process during development. In 2013, Mustata et al. described the isolation of intestinal fetal progenitors growing as spheroids in the ex vivo culture system initially implemented by Sato et al. (2009) to grow adult intestinal stem cells. Noteworthy, fetal-derived spheroids have high self-renewal capacity making easy their indefinite maintenance in culture. Here, we report an adapted protocol for isolation and ex vivo culture and maintenance of fetal epithelial progenitors from distal pre-glandular ...
[摘要] 来自消化道的鼠胎儿祖细胞的分离和三维培养代表了研究在发育过程中细胞分化过程开始前存在的这些上皮细胞的性质和生物学特征的新方法。在2013年，Mustata等人描述了在最初由佐藤等人实施的离体培养系统中分离作为球体生长的肠胎细胞祖细胞。 >（2009）增长成年肠干细胞。值得注意的是，胎儿衍生的球体具有较高的自我更新能力，使其在文化中的无限期维护变得容易。在这里，我们报告了用于分离和远离前胃腺胃生长为胃球体的胎儿上皮祖细胞的分离和离体培养和维持的修改方案（Fernandez Vallone等人， 2016）。
背景 来自腺体的小鼠成体干细胞可以在3D matrigel中离体生长，作为“迷你腺体”无限期（Barker等人，2010） 。与在EGF，Noggin和R-spondin 1存在下生长的小肠的干细胞相比，成年胃干细胞需要进一步补充Fgf10，胃泌素，Wnt3a和更高浓度的R-spondin 1以获得生产性 - 文化。相比之下，到目前为止，很少知道在发育期间排列前腺上皮细胞的胎儿细胞。到目前为止，它们的性质以及其离体的潜在生长特性未明确。基于以前的研究，确定胎儿小肠（Mustata等人，2013年）中存在的细胞，我们报告了作为球体的小鼠胎儿胃祖细胞的培养（Fernandez Vallone et al。 。，2016）。可以在2009年由佐藤等人先前报道的培养基中重复胃祖细胞以生长小肠成体干细胞，与成人型胃干细胞相反，它们不需要额外的生长因子补充（Fgf10，Wnt3a或胃泌素）。 ...
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| Identification of Factors in Regulating a Protein Ubiquitination by Immunoprecipitation: a Case Study of TRF2 on Human REST4 Ubiquitination
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Author:
Date:
2015-07-05
[Abstract] Ubiquitination is the first step of the ubiquitin-proteasome pathway that regulates cells for their homeostatic functions and is an enzymatic, protein post-translational modification process in which ubiquitin is transferred to a target protein substrate by a set of three ubiquitin enzymes (Weissman et al., 2011; Bhattacharyya et al., 2014; Ristic et al., 2014). Given the importance of this process, it is plausible that ubiquitination is under strict control by many factors and that the regulatory machineries are protein-specific. An assay for the detection of a specific protein ubiquitination will enable us to examine whether a factor has a function to regulate the ubiquitination of this protein. Here we describe a protocol that detects the ubiquitination ...
[摘要] 泛素化是泛素 - 蛋白酶体通路的第一步，其调节细胞的内环境稳定功能，并且是酶，蛋白质翻译后修饰过程，其中通过一组三种泛素酶将泛素转移到靶蛋白质底物（Weissman et al。，2011; Bhattacharyya et al。，2014; Ristic 等人，2014）。考虑到这一过程的重要性，似乎可能的是，泛素化受到许多因素的严格控制，并且调节机制是蛋白质特异性的。用于检测特异性蛋白泛素化的测定将使我们能够检查因子是否具有调节该蛋白的泛素化的功能。在这里我们描述一个协议，检测人类REST4蛋白在培养细胞中的神经选择性剪接异构体（RE-1沉默转录因子），拮抗REST对神经分化和神经元形成的镇压功能的泛素化状态。使用这个协议，我们显示端粒结合蛋白TRF2通过抑制其泛素化稳定人类REST4的表达。这表明TRF2在神经分化中发挥阳性作用（Ovando-Roche等人，2014）。该方案还可用于检测其他感兴趣的蛋白质的泛素化。
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