| Immunoprecipitation of Acetyl-lysine and Western Blotting of Long-chain acyl-CoA Dehydrogenases and Beta-hydroxyacyl-CoA Dehydrogenase in Palmitic Acid Treated Human Renal Tubular Epithelial Cells
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] As one of the main energy metabolism organs, kidney has been proved to have high energy requirements and are more inclined to fatty acid metabolism as the main energy source. Long-chain acyl-CoA dehydrogenases (LCAD) and beta-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase (beta-HAD), key enzymes involved in fatty acid oxidation, has been identified as the substrate of acetyltransferase GCN5L1 and deacetylase Sirt3. Acetylation levels of LCAD and beta-HAD regulate its enzymes activity and thus affect fatty acid oxidation rate. Moreover, immunoprecipitation is a key assay for the detection of LCAD and beta-HAD acetylation levels. Here we describe a protocol of immunoprecipitation of acetyl-lysine and western blotting of LCAD and beta-HAD in palmitic acid treated HK-2 cells (human renal tubular epithelial ...
[摘要] [摘要] 甲作为肾脏的主要能量代谢器官之一，肾脏已被证明具有很高的能量需求，并且更倾向于将脂肪酸代谢为主要能量来源。 长链酰基辅酶A脱氢酶（LCAD）和Beta-羟酰基 -CoA脱氢酶（β-HAD），涉及的关键酶脂肪酸氧化，已被确定为乙酰转移酶GCN5L1和脱乙酰酶Sirt3的底物。 LCAD和β-HAD的乙酰化水平调节其酶的活性，从而影响脂肪酸的氧化速率。 此外，免疫沉淀是检测LCAD和β-HAD乙酰化水平的关键方法。在这里，我们描述了在棕榈酸处理的HK-2细胞（人肾小管上皮细胞）中乙酰赖氨酸的免疫沉淀以及LCAD和β-HAD的免疫印迹实验。 该方案为读者提供了清晰的步骤，因此该方法可用于检测各种蛋白质的乙酰化水平。
[背景 ] 翻译后修饰（PT Ms）使细胞具有高度动态的机制来调节细胞途径（Zhao 等，2010）。 乙酰化已成为主要的翻译后蛋白质修饰之一。越来越多的证据小号指示乙酰化对手磷酸化的线粒体调控修改（Henriksen的等人，2012） 。 过线粒体蛋白质的60％被乙酰化，作为声明，这是参与能量代谢例如三羧酸（TCA）循环，氧化磷酸化（OXPHOS），脂肪酸氧化和氨基酸代谢（Hirschey 等人，2010 ; ...
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| Analyses of Root-secreted Acid Phosphatase Activity in Arabidopsis
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Date:
2017-04-05
[Abstract] Induction and secretion of acid phosphatase (APase) is a universal adaptive response of higher plants to low-phosphate stress (Tran et al., 2010). The intracellular APases are likely involved in the remobilization and recycling of phosphate (Pi) from intracellular Pi reserves, whereas the extracellular or secreted APases are believed to release Pi from organophosphate compounds in the rhizosphere. The phosphate starvation-induced secreted APases can be released into the rhizosphere or retained on root surfaces (root-associated APases). In this article, we describe the protocols for analyzing root-secreted APase activity in the model plant Arabidopsis thaliana (Arabidopsis). In Arabidopsis, the activity of both root-associated APases and APases that are ...
[摘要] 酸性磷酸酶（APase）的诱导和分泌是高等植物对低磷酸盐胁迫的普遍适应性反应（Tran et al。，2010）。细胞内APase可能参与磷酸盐（Pi）从细胞内Pi储备的再利用和再循环，而细胞外或分泌的APase被认为从根际中的有机磷酸盐化合物中释放出Pi。磷酸盐饥饿诱导的分泌的APase可以释放到根际中或保留在根表面（根相关的APase）上。在本文中，我们描述了在拟南芥（Arabidopsis thaliana）（拟南芥）中分析根分泌的APase活性的方案。在拟南芥中，释放到根际的根系相关APase和APase的活性可以基于它们切割合成底物，释放黄色产物的对硝基苯基磷酸（pNPP）的能力来定量，对硝基苯酚（pNP）（Wang等，2011和2104）。根系相关的APase活性也可以通过将显色底物5-溴-4-氯-3-吲哚基 - 磷酸酯（BCIP）施用到根表面来直接显现（Lloyd等人，2001; Tomscha et al。 ，2004; Wang等人，2011和2014），而释放到根际中的APase的同功酶可以使用凝胶内测定法（Trull和Deikman，1998; Tomscha等人，2004; Wang等人， 2011年和2014年）。之前已经描述了用于分析拟南芥细胞内APase活性的方案（Vicki和William，2013）。
【背景】磷酸盐（Pi）是植物通过根系发生磷的主要形式，大多数土壤中的Pi水平较低，导致Pi饿。为了应对这种营养压力，植物引发了一系列适应性反应，增加了其生存和增长。 ...
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