| RNA Strand Displacement Assay for Hepatitis E Virus Helicase
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] The hepatitis E virus (HEV) helicase uses ATP to unwind the RNA duplexes. This is an essential step for viral replication. This protocol aims to measure the double strand RNA unwinding activity of the HEV helicase.
[摘要] 乙型肝炎病毒（HEV）解旋酶使用ATP来解开RNA双链体。 这是病毒复制的重要步骤。 该方案旨在测量HEV解旋酶的双链RNA展开活性。
已经使用放射性标记的双链RNA（dsRNA，Karpe等人，2010）测量了HEV解旋酶的RNA展开活性。 我们已经建立了用于测量HEV解旋酶的dsRNA展开活性的非放射性测定方案。 该测定利用荧光标记的RNA来测量从人肝癌细胞纯化的HEV解旋酶蛋白的活性，从而消除了处理放射性物质的需要。
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| RNA-dependent RNA Polymerase Assay for Hepatitis E Virus
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) is essential for the replication of viral RNA for RNA viruses. It synthesizes the complementary strand of viral genomic RNA, which is used subsequently as a template to generate more copies of viral genome. This assay measures activity of the hepatitis E virus (HEV) RdRp. In contrast to protocols available to assay the RdRp activity of many other viruses, this assay utilizes DIG-11-UTP as a nonradioactive alternative to 32P-UTP, thereby increasing the convenience of performing the assay.
[摘要] RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）对RNA病毒的病毒RNA的复制至关重要。 它合成病毒基因组RNA的互补链，其随后用作模板以产生更多的病毒基因组拷贝。 该测定法测定戊型肝炎病毒（HEV）RdRp的活性。 与可用于测定许多其他病毒的RdRp活性的方案相比，该测定法使用DIG-11-UTP作为32P-UTP的非放射性替代物，从而增加了进行测定的便利性。
没有测定可测量HEV RdRp的活性。 已经使用放射性标记的核苷酸（Behrens等人，1996）在少数其他病毒如丙型肝炎病毒中测量了RdRp活性。 我们已经调整了Behrens等人所描述的协议。 （1996），并将其修饰为建立非放射性测定方案，其依赖于将DIG-11-UTP掺入反义RNA链中作为HEV RdRp的活性的量度。 该测定使用体外合成的病毒RNA片段作为模板，以使用基于化学发光的策略来测量从人肝癌细胞纯化的HEV RdRp蛋白的活性。
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| Isolation of Exosomes from Semen for in vitro Uptake and HIV-1 Infection Assays
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Exosomes are membranous extracellular nanovesicles of endocytic origin. Exosomes are known to carry host and pathogen-derived genomic, proteomic, lipidomic cargos and other extraneous molecules. Exosomes are secreted by diverse cell types into the extracellular milieu and are subsequently internalized by recipient neighboring or distal cells. Upon internalization, exosomes condition recipient cells by donating their cargos and/or activating various signal transduction pathways, consequently regulating physiological and pathophysiological processes. Exosomes facilitate intercellular communication, modulate cellular phenotype, and regulate microbial pathogenesis. We have previously shown that semen exosomes (SE) inhibit HIV-1 replication in various cell types. Here, we describe detailed ...
[摘要] 外来体是内膜起源的膜性胞外纳米囊。 已知外来载体携带宿主和病原体衍生的基因组，蛋白质组，脂质体载体和其他外来分子。 外来体由不同细胞类型分泌到细胞外环境中，随后被受体相邻细胞或远端细胞内化。 在内化后，外来体通过捐赠其载体和或激活各种信号转导途径来调节受体细胞，从而调节生理和病理生理过程。 外来体促进细胞间通讯，调节细胞表型和调节微生物发病机制。 我们以前表明精液外来体（SE）抑制各种细胞类型的HIV-1复制。 在这里，我们描述特征SE的详细协议。 该方案可以适应或修改，并用于评估感兴趣的其他细胞外小泡。
外来体是由许多细胞类型的晚期内体室内的内体膜向内发生的结果而引起的膜状纳米囊（Simons and Raposo，2009）。外来体被许多细胞类型（Iglesias等人，2012）释放到细胞外环境中，并且被发现在包括血液在内的生物流体中（Kaur等人，2014）尿（Liem等人，2013）唾液（Madison等人，2015）和母乳（Madison等人，2014; Naslund ，2014）。人类精液含有由包括前列腺分泌腺泡细胞在内的男性生殖道组织产生的纳米囊泡的异质群体（Madison等人，2014; Madison等人，2015） （Sahlen等人，2002）和附睾上皮细胞（Frenette等人，2010）以及vasa感染，睾丸和囊泡腺细胞（ ...
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