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Date:
2017-04-05
[Abstract] RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) is essential for the replication of viral RNA for RNA viruses. It synthesizes the complementary strand of viral genomic RNA, which is used subsequently as a template to generate more copies of viral genome. This assay measures activity of the hepatitis E virus (HEV) RdRp. In contrast to protocols available to assay the RdRp activity of many other viruses, this assay utilizes DIG-11-UTP as a nonradioactive alternative to 32P-UTP, thereby increasing the convenience of performing the assay.
[摘要] RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）对RNA病毒的病毒RNA的复制至关重要。 它合成病毒基因组RNA的互补链，其随后用作模板以产生更多的病毒基因组拷贝。 该测定法测定戊型肝炎病毒（HEV）RdRp的活性。 与可用于测定许多其他病毒的RdRp活性的方案相比，该测定法使用DIG-11-UTP作为32P-UTP的非放射性替代物，从而增加了进行测定的便利性。
没有测定可测量HEV RdRp的活性。 已经使用放射性标记的核苷酸（Behrens等人，1996）在少数其他病毒如丙型肝炎病毒中测量了RdRp活性。 我们已经调整了Behrens等人所描述的协议。 （1996），并将其修饰为建立非放射性测定方案，其依赖于将DIG-11-UTP掺入反义RNA链中作为HEV RdRp的活性的量度。 该测定使用体外合成的病毒RNA片段作为模板，以使用基于化学发光的策略来测量从人肝癌细胞纯化的HEV RdRp蛋白的活性。
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