| Measurement of the Galactanase Activity of the GanB Galactanase Protein from Bacillus subtilis
|
|
Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] The activity of the endo-β-1,4-galactanase GanB from B. subtilis on the high molecular weight β-1,4-galactan was determined quantitatively by the measurement of the increase of the reducing power or with the dyed substrate Azo-galactan. The generated degradation products were analyzed using thinlayer-chromatography (TLC) or high-performance anion-exchange chromatography (HPAEC).
[摘要] 来自B的内切-β-1,4-半乳糖苷酶GanB的活性。 通过测量还原力的增加或染色底物偶氮半乳聚糖来定量测定高分子量β-1,4-半乳聚糖上的枯草芽孢杆菌。 使用薄层色谱（TLC）或高效阴离子交换层析（HPAEC）分析产生的降解产物。
枯草芽孢杆菌具有用于植物细胞壁多糖的综合系统，包括编码半乳聚糖利用元素的基因簇ganSPQAB（Watzlawick等人，2016）。 半乳聚糖是高分子量半乳糖，并且在果胶中被认为是I型鼠李糖半乳糖醛酸的侧链。 其降解通过内切β1,4半乳聚糖酶（EC 3.2.1.89）进行。 半乳聚糖的利用。 枯草芽孢杆菌涉及细胞外半乳聚糖酶GanB，裂解链内的高分子半乳聚糖，并产生进入细胞壁的短的低聚物进一步降解。 来自的 ganB 基因。 枯草芽孢杆菌在大肠杆菌（Watzlawick等人，2016）中克隆并表达，纯化的His标记的成熟蛋白的酶学性质由 半乳聚糖酶测定。
|
|
|
| Isolation of Ribosomal Particles from the Unicellular Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803
|
|
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Isolation of ribosomal particles is an essential step in the study of ribosomal components as well as in the analysis of trans-acting factors that interact with the ribosome to regulate protein synthesis and modulate the expression profile of the cell in response to different environmental conditions. In this protocol, we describe a procedure for the isolation of 70S ribosomes from the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 (hereafter Synechocystis). We have successfully used this protocol in our study of the cyanobacterial ribosomal-associated protein LrtA, which is a homologue of bacterial HPF (hibernation promoting factor) (Galmozzi et al., 2016).
[摘要] 核糖体颗粒的分离是研究核糖体组分以及与核糖体相互作用以调节蛋白质合成并调节细胞表达谱的反式因子的分析中必不可少的步骤响应不同的环境条件。在本协议中，我们描述了从单细胞蓝细菌集胞藻分离70S核糖体的过程。 PCC 6803（以下简称集胞藻）。我们已经成功地使用这个方案来研究蓝细菌核糖体相关蛋白LrtA，它是细菌HPF（冬眠促进因子）的同系物（Galmozzi等人，2016）。
背景 据报道蓝藻核糖体几乎没有生物化学研究。已经通过差速离心分离70S核糖体颗粒，然后通过二维电泳分析核糖体蛋白质（Sato et al。，et al。 ，1998）。核糖体也已经从聚球藻（Spechococcus）进行制备。 PCC 6301细胞使用组合差速离心和蔗糖步骤梯度的方案（Sugita等人，2000）。通过差速离心分离细胞提取物也被用于制备核糖体样品用于在不同的聚球藻菌株中开发体外翻译系统（Mutsuda和Sugiura，2006 ）。基于针对聚球藻（Sugita等人，2000）所述的方法，本文所述的针对集胞藻的方法允许使用以下方式纯化核糖体颗粒线性蔗糖梯度的超速离心。
|
|
|