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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Major Histocompatibility Complex (MHC) tetramers have been used for two decades to detect, isolate and characterize T cells specific for various pathogens and tumor antigens. In the context of Human Immunodeficiency Virus (HIV) infection, antigen-specific CD8+ T cells have been extensively studied ex vivo, as they can be readily detected by HIV peptide-loaded MHC class I tetramers. In contrast, the detection of HIV-specific CD4+ T cells has proven more challenging, due to the intrinsically lower clonal expansion rates of CD4+ T cells, and to the preferential depletion of HIV-specific CD4+ T cells in the course of HIV infection.
In the following protocol, we describe a simple method that facilitates the identification of CD4+ ...
[摘要] 主要组织相容性复合物（MHC）四聚体已经使用二十年来检测，分离和表征各种病原体和肿瘤抗原特异性的T细胞。在人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的背景下，抗原特异性CD8 +细胞已经在体外广泛研究，因为它们可以容易地被HIV肽 - 加载MHC I类四聚体。相比之下，HIV特异性CD4 + sup + T细胞的检测已被证明更具挑战性，因为CD4 + sup + T细胞的本质上较低的克隆扩增率以及优先艾滋病毒感染过程中艾滋病毒特异性CD4 + T细胞的消耗。＆nbsp;在以下协议中，我们描述了一种简单的方法，该方法有助于使用肽负载的MHC II类四聚体来鉴定HIV-1衣壳表位特异性的CD4 + / T细胞。可以分析四聚体标记的CD4 T细胞的细胞表面表型和/或FACS分选用于进一步的下游应用。成功检测特异性CD4 + / / T细胞离体的关键是选择导致高亲和力T细胞受体（TCR）的肽/ MHC II组合， （Benati等人，2016）。 MHC II四聚体阳性细胞的可靠检测的第二个关键点是系统地使用负载无关肽的对照四聚体，样品和对照管在相同的条件下进行处理。背景 在用抗PE微珠对四聚体-PE标记的细胞进行磁力富集后，在纯化的CD4 + T细胞中检测到罕见的HIV特异性MHC II四聚体阳性细胞（Seth等人， em>。，2005）。我们发现使用经验证的肽/ MHC ...
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