| Pollen Germination and Pollen Tube Growth of Arabidopsis thaliana: In vitro and Semi in vivo Methods
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Studies of pollen germination and post-germination development are not only essential for understanding plant reproduction but also are an excellent model system for tip-based growth. Here we describe easy, reproducible methods for germination and growth of pollen from the model plant Arabidopsis thaliana in artificial conditions. Our growth system can be used both for pollen placed directly on this artificial substrate as well as for the so-called ‘semi in vivo’ method. This is where a pistil is cut shortly after hand-pollination and the pollen tubes grow through the plant tissue and emerge from the cut end onto the surface of the artificial medium.
[摘要] 花粉萌发和萌发后发育的研究不仅对于理解植物繁殖是必不可少的，而且也是用于尖端生长的优秀模型系统。 在这里，我们描述了简单，可重复的方法，用于在人工条件下从模式植物拟南芥中萌发和生长花粉。 我们的生长系统既可用于直接置于该人工基质上的花粉，也可用于所谓的“半体内”方法。 这是在手动授粉后不久切割雌蕊并且花粉管通过植物组织生长并从切割末端出现在人工培养基表面上的地方。
【背景】 开花植物的花粉被广泛用作快速，尖端生长的模型系统。当然，花粉生物学的研究对于了解植物的生育力和生殖发育也是必不可少的。然而，一种简单可靠的方法是从模式植物拟南芥中萌发花粉并在体外维持快速，形态正常的花粉管生长令人沮丧地难以捉摸。在开发我们自己的方法（Rodriguez-Enriquez et al。，2013）之前，我们尝试复制几种已发表的方法，但经过多次尝试后，我们未能产生令人满意的结果。例如，在实验室中复制Boavida和McCormick的方法很困难，因为它具有非常窄的温度最佳值（22°C），这种情况显然不能反映 A的生殖生物学。拟南芥（Boavida和McCormick，2007）。此外，在该方法中存在发芽率和局部花粉密度的问题，其也不完全反映在柱头表面上的自然事件。我们的第一个线索是，体外可靠的花粉萌发所需的关键“缺失因子”来自观察到放置 ...
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| Generation and Selection of Transgenic Olive Plants
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Olive (Olea europaea L.) is one of the most important oil crops in the Mediterranean basin. Biotechnological improvement of this species is hampered by the recalcitrant nature of olive tissue to regenerate in vitro. In previous investigations, our group has developed a reliable Agrobacterium-mediated transformation protocol using olive somatic embryos as explants (Torreblanca et al., 2010). Embryogenic cultures derived from radicles of matured zygotic embryos are infected with Agrobacterium tumefaciens, AGL1 strain, containing a binary plasmid with the gene of interest and the nptII selection gene. After a meticulous selection procedure, carried out using solid and liquid media supplemented with paromomycin, the putative transformed ...
[摘要] 橄榄油（Olea europaea L.）是地中海盆地最重要的石油作物之一。生物技术的改善受到橄榄组织在体外再生的顽固性质的阻碍。在以前的研究中，我们小组开发了一个可靠的土壤杆菌介导的转化方案，使用橄榄体细胞胚作为外植体（Torreblanca et al。，2010）。含有具有感兴趣基因和nptII选择基因的二元质粒的根瘤农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）AGL1菌株感染源自成熟合子胚胎胚根的胚性培养物。经过细致的选择程序，使用补充巴龙霉素的固体和液体培养基进行，建立推定的转化系。其转基因性质的初步确认是通过PCR扩增进行的。之后，可以通过有效的再生方案获得植物，其主要特征是使用低离子强度的矿物制剂，在液体培养基中用于培养物同步的阶段以及使用半渗透性乙酸纤维素膜进行胚胎成熟（Cerezo et al。 ，2011）。转基因插入的最终确认通过Southern或Northern分析使用再生植物的叶样品进行。
【背景】由Torreblanca等人开发的协议。 （2010）与Rugini等人（2000）开发的先前的橄榄转化协议有所不同，主要是外植体的种类，土壤杆菌菌株及其选择方法。 Rugini等人（2000）使用胚性质量作为外植体，将其在LBA4404农杆菌菌株的细菌悬浮液中温育48小时。感染后，将外植体在水中漂洗并在补充有250mg ...
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| Metabolic Heavy Isotope Labeling to Study Glycerophospholipid Homeostasis of Cultured Cells
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Glycerophospholipids consist of a glycerophosphate backbone to which are esterified two acyl chains and a polar head group. The head group (e.g., choline, ethanolamine, serine or inositol) defines the glycerophospholipid class, while the acyl chains together with the head group define the glycerophospholipid molecular species. Stable heavy isotope (e.g., deuterium)-labeled head group precursors added to the culture medium incorporate efficiently into glycerophospholipids of mammalian cells, which allows one to determine the rates of synthesis, acyl chain remodeling or turnover of the individual glycerophospholipids using mass spectrometry. This protocol describes how to study the metabolism of the major mammalian glycerophospholipids i.e., phosphatidylcholines, ...
[摘要] 甘油磷脂由甘油磷酸酯骨架组成，酯基化两个酰基链和极性头基。头组（例如胆碱，乙醇胺，丝氨酸或肌醇）限定了甘油磷脂类，而酰基链与头基一起限定了甘油磷脂分子种类。添加到培养基中的稳定的重质同位素（例如，氘）标记的头基前体有效地并入哺乳动物细胞的甘油磷脂中，这允许人们确定合成速率，酰基链重塑或周转使用质谱法测定个体甘油磷脂。该方案描述了如何用这种方法研究主要哺乳动物甘油磷脂的代谢，即磷脂酰胆碱，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇。
背景 放射性标记的前体已广泛用于研究培养细胞中的甘油磷脂（GPL）代谢。然而，这种方法有严重的缺点。首先，研究GPL的所有分子种类的代谢是不可行的，因为不可能的事实，即没有恢复到高度复杂和耗时的方案来将各个分子种类彼此分离（Patton＆ em等人，1982），这显然是研究其新陈代谢所必需的。第二，所需的放射性同位素相当昂贵。第三，为了最佳标记，未标记的前体应尽可能耗尽介质。第四，可以同时向细胞中加入两种不同的前体，即使对同位素光谱之间的重叠进行准确校正是必要的对所收集的部分进行液体闪烁计数。由于这些障碍，许多研究最近引入了研究GPL代谢的替代方法（例如，Heikinheimo和Somerharju，2002; de Kroon，2007; Kainu等人2008年; Postle和Hunt，2009; ...
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