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Strep-tag Antibody

Company: QIAGEN
Catalog#: 34850
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Chase Assay of Protein Stability in Haloferax volcanii
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract]  Highly regulated and targeted protein degradation plays a fundamental role in almost all cellular processes. Determination of the protein half-life by the chase assay serves as a powerful and popular strategy to compare the protein stability and study proteolysis pathways in cells. Here, we describe a chase assay in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon as the model organism. [摘要]  高度调节和靶向的蛋白质降解在几乎所有的细胞过程中发挥重要作用。通过追踪测定法测定蛋白质半衰期是比较蛋白质稳定性和研究细胞中蛋白水解途径的有力和普遍的策略。在这里,我们描述了作为模型生物体的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中的追踪测定。

背景 在真核生物中,泛素蛋白酶体系统在高选择性和靶向性蛋白水解中起主要作用(Glickman and Ciechanover,2002)。最近的证据表明,小型古细菌泛素样修饰蛋白或SAMPs也起到了蛋白酶体破坏的靶向蛋白的作用(Maupin-Furlow,2014; Anjum等人,2015; Fu et al。 。,2016)。体内蛋白质半衰期的测量提供了研究蛋白水解途径的直接途径。环己酰胺追踪和脉冲追踪测定通常用于监测真核生物中靶向蛋白质的降解(Zhou,2004)。前一种方法用于确定放线菌酮抑制平移伸长后所有细胞蛋白的半衰期;而脉冲追踪测定法测量新合成(脉冲标记)蛋白质的周转率,而不干扰正常的细胞生长。与真核系统相比,确定古细菌中一种给定蛋白质半衰期的快速简便方法尚未明确。因此,我们开发了一种方案,用于测量盐爱好的考古Haloferax volcanii的体内蛋白质稳定性。使用翻译抑制剂(茴香霉素)和转录(放线菌素D)来最小化该古细菌中新蛋白质的合成。 ...

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