| An Optimized Method for the Production Using PEI, Titration and Neutralization of SARS-CoV Spike Luciferase Pseudotypes
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] The protocol outlined represents a cost-effective, rapid and reliable method for the generation of high-titre viral pseudotype particles with the wild-type SARS-CoV spike protein on a lentiviral vector core using the widely available transfection reagent PEI. This protocol is optimized for transfection in 6-well plates; however it can be readily scaled to different production volumes according to application. This protocol has multiple benefits including the use of readily available reagents, consistent, high pseudotype virus production Relative Luminescence Units (RLU) titres and rapid generation of novel coronavirus pseudotypes for research into strain variation, tropism and immunogenicity/sero-prevalence.
[摘要] 概述的方案代表了使用广泛可用的转染试剂PEI在慢病毒载体核心上产生具有野生型SARS-CoV刺突蛋白的高滴度病毒假型颗粒的成本效益，快速和可靠的方法。 该协议针对6孔板中的转染进行了优化; 然而，根据应用，它可以容易地扩展到不同的生产量。 该方案具有多种益处，包括使用容易获得的试剂，一致的，高假型病毒生产相对发光单位（RLU）滴度，并快速产生用于研究菌株变异，趋向性和免疫原性/血清流行性的新型冠状病毒假型。
【背景】假型病毒颗粒（PV）的生产和使用对于许多病毒是广泛建立的，并且在血清学，监测和疫苗开发领域的应用是多方面的（Temperton等人，2015; Carnell等人，2015）。 PV已经被证明是研究病毒包膜糖蛋白突变对血清学结果，病毒向性和免疫原性研究的影响的有力工具，特别是当与表位信息结合时。 PV是嵌合病毒构建体，其中一个病毒的外（表面）糖蛋白与另一病毒的复制缺陷病毒核心组合。 ...
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| Measurement of Dipeptidylpeptidase Activity in vitro and in vivo
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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Dipeptidylpeptidases (DPPs) are serine proteases, which cleave small proteins and peptides possessing a proline or an alanine in the second position of their N-terminus. Among the members of this family, dipeptidylpeptidase 4 (DPP4) is constitutively expressed in the extracellular space. DPP4 is found at the surface of many hematopoietic and non-hematopoietic cells and is also present in many biological fluids in a bioactive soluble form. DPP4 expression is modulated by inflammation, and measurements of its activity have been used as biomarker for disease. Here, we describe a method to evaluate the enzymatic activity of DPP4 in vitro and in vivo.
[摘要] 二肽基肽酶（DPPs）是丝氨酸蛋白酶，其在其N末端的第二位置切割具有脯氨酸或丙氨酸的小蛋白质和肽。在该家族成员中，二肽基肽酶4（DPP4）在细胞外空间中组成型表达。 DPP4存在于许多造血细胞和非造血细胞的表面，并且也以生物活性可溶形式存在于许多生物流体中。 DPP4表达受炎症调节，其活性的测定已被用作疾病的生物标志物。在这里，我们描述了一种评估体外DPP4和/或体内酶活性的方法。
背景 DPPs的酶活性的大小可以是炎症的指标;以及用于DPP4抑制剂的重要药效学参数。在这里，我们报告了市售试剂盒用于评估体外DPP-酶活性的详细信息;并提供测试生物样品生成的细节。此外，我们描述了该方法如何用于体内DPP活性的评估。
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