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Author:
Date:
2015-06-05
[Abstract] Phosphorylation of tyrosine, serine, and threonine residues is critical for the control of protein activity involved in various cellular events. An assortment of kinases and phosphatases regulate intracellular protein phosphorylation in many different cell signaling pathways. These pathways include T and B cell signaling, regulating growth and cell cycle control, plus cytokine, chemokine, and stress responses. Phosphoflow assays combine phosphoprotein-specific antibodies with the power of flow cytometry to enhance phosphoprotein study. In our assay, peripheral blood mononuclear cells are stimulated by cytokines, fixed, surface-stained with a cocktail of antibodies labeled with MAXPAR (brand name) metal-chelating polymers and permeabilized with methanol. They are then stained with ...
[摘要] 酪氨酸，丝氨酸和苏氨酸残基的磷酸化对于控制参与各种细胞事件的蛋白质活性是至关重要的。各种激酶和磷酸酶调节许多不同细胞信号传导途径中的细胞内蛋白磷酸化。这些途径包括T和B细胞信号传导，调节生长和细胞周期控制，加上细胞因子，趋化因子和应激反应。 Phosphoflow测定结合磷蛋白特异性抗体与流式细胞术的力量，以增强磷蛋白研究。在我们的测定中，外周血单核细胞被细胞因子刺激，固定，用用MAXPAR（商品名）金属螯合聚合物标记并用甲醇透化的抗体的混合物表面染色。然后用细胞内磷酸特异性抗体染色。
我们使用CyTOF TM 质谱仪获取ICP-MS（电感耦合等离子体质谱）数据。选择的当前质量窗口大约是AW 103-203，其包括用于大多数抗体标记的镧系元素，以及用于DNA嵌入剂的铱和铑。使用FlowJo软件的双计数信号数据的后续分析允许基于每个质量通道中的双计数信号来分析细胞类型。确定每种细胞类型的百分比，并报告为父细胞类型的百分比。报道中值以定量响应刺激的每种蛋白质的磷酸化水平。比较样品之间的磷酸化水平可以提供对免疫系统状态的了解。
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