Enzymatic Assays and Enzyme Histochemistry of Tuta absoluta Feeding on Tomato Leaves
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Enzymes play a key role in insect-plant relationships. For a better understanding of these interactions, we analyzed Tuta absoluta digestive enzymes. Here, we describe a detailed protocol for the detection of trypsin and papain-like enzymes in Tuta absoluta larvae by enzyme histochemistry. This assay uses frozen and unfixed samples to avoid the loss of enzymatic activity. We also describe a protocol for the quantification of trypsin and papain-like enzymes in the larvae of Tuta absoluta at different developmental instars.
[摘要] 酶在昆虫植物关系中起着关键作用。 为了更好地理解这些相互作用,我们分析了 Tuta absoluta 消化酶。 在这里,我们描述了通过酶组织化学检测 Tuta absoluta 幼虫中的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶样酶的详细方案。 该测定使用冷冻和未固定的样品以避免酶活性的丧失。 我们还描述了在不同发育期的 Tuta absoluta 幼虫中量化胰蛋白酶和木瓜蛋白酶样酶的方案。
【背景】植物和昆虫共存了数百万年,并进化出一系列相互作用,影响不同水平的生物。昆虫设法发展不同的生理和形态适应,以克服植物防御机制。因此,更好地了解其重要功能将有助于其有针对性的控制。昆虫的不同生理功能依赖于酶:消化,呼吸,循环,肌肉,神经,生殖和内分泌。几种酶参与消化。蛋白酶如胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,胃蛋白酶或羧肽酶是蛋白质消化的原因,蛋白质消化是昆虫的氨基酸来源。因此,消化蛋白酶抑制剂已被成功用于提高植物对昆虫的抗性(Smigocki et al。,2013; Quilis et al。,2014; Hamza et al ...
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In vitro NLK Kinase Assay
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] This protocol provides step by step instructions to perform an in vitro kinase assay for nemo-like kinase. In addition, this protocol also describes an efficient method using mild lysis buffer for expression and purification of Glutathione S-transferase (GST) fusion proteins.
[摘要] 该协议提供了一步一步的指导,以进行nemo样激酶的体外激酶测定。 此外,该方案还描述了使用温和裂解缓冲液来表达和纯化谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白的有效方法。
【背景】果蝇nemo已经被确定为在发育中的果蝇眼中光感受器簇的关键调节剂(Choi和Benzer,1994)。 据报道,nemo是不同物种间保守的。 该哺乳动物同系物是类似于Nemo的激酶(NLK)(Brott等人,1998; Rocheleau等人,1999)。 NLK是CMGC集团(CDK,MAPK,GSK3和CLK)的成员,也属于非典型的MAPK家族。 NLK通过转录因子调节多种细胞机制,所述转录因子包括在不同信号传导途径中的关键参与者TCF / LEF1,NICD和FOXO(Ishitani等人,1999; Ishitani等人, ,2010; Kim等人,2010)。 此外,最近我们已经将NLK鉴定为Yes相关蛋白(YAP)的新型激酶,YAP是Hippo途径中的共转录激活剂(Moon等人,2017)。 该协议描述了用于测量类似尼莫地来激酶活性的体外方法。
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Isolation of Ribosomal Particles from the Unicellular Cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803
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2017-03-20
[Abstract] Isolation of ribosomal particles is an essential step in the study of ribosomal components as well as in the analysis of trans-acting factors that interact with the ribosome to regulate protein synthesis and modulate the expression profile of the cell in response to different environmental conditions. In this protocol, we describe a procedure for the isolation of 70S ribosomes from the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 (hereafter Synechocystis). We have successfully used this protocol in our study of the cyanobacterial ribosomal-associated protein LrtA, which is a homologue of bacterial HPF (hibernation promoting factor) (Galmozzi et al., 2016).
[摘要] 核糖体颗粒的分离是研究核糖体组分以及与核糖体相互作用以调节蛋白质合成并调节细胞表达谱的反式因子的分析中必不可少的步骤响应不同的环境条件。在本协议中,我们描述了从单细胞蓝细菌集胞藻分离70S核糖体的过程。 PCC 6803(以下简称集胞藻)。我们已经成功地使用这个方案来研究蓝细菌核糖体相关蛋白LrtA,它是细菌HPF(冬眠促进因子)的同系物(Galmozzi等人,2016)。
背景 据报道蓝藻核糖体几乎没有生物化学研究。已经通过差速离心分离70S核糖体颗粒,然后通过二维电泳分析核糖体蛋白质(Sato et al。,et al。 ,1998)。核糖体也已经从聚球藻(Spechococcus)进行制备。 PCC 6301细胞使用组合差速离心和蔗糖步骤梯度的方案(Sugita等人,2000)。通过差速离心分离细胞提取物也被用于制备核糖体样品用于在不同的聚球藻菌株中开发体外翻译系统(Mutsuda和Sugiura,2006 )。基于针对聚球藻(Sugita等人,2000)所述的方法,本文所述的针对集胞藻的方法允许使用以下方式纯化核糖体颗粒线性蔗糖梯度的超速离心。
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