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Author:
Date:
2015-06-05
[Abstract] We previously reported enzymatic activity assays for the base excision repair (BER) enzymes DNA polymerase β (pol β), aprataxin (APTX), and flap endonuclease 1 (FEN1) in cell extracts from Saccharomyces cerevisiae (Çağlayan and Wilson, 2014). Here, we describe a method to prepare cell extracts from vertebrate cells to investigate these enzymatic activities for the processing of the 5´-adenylated-sugar phosphate-containing BER intermediate. This new protocol complements our previous publication. The cell lines used are wild-type and APTX-deficient human lymphoblast cells from an Ataxia with Oculomotor Apraxia Type 1 (AOA1) disease patient, wild-type and APTX-null DT40 chicken B cells, and mouse embryonic fibroblast (MEF) cells. This protocol is a quick and efficient way to make ...
[摘要] 我们先前报道了来自酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的细胞提取物中的碱基切除修复（BER）酶DNA聚合酶β（polβ），aprataxin（APTX）和瓣膜内切核酸酶1（FEN1）的酶活性测定 和Wilson，2014）。 在这里，我们描述了一种从脊椎动物细胞中制备细胞提取物以研究这些酶活性用于加工含5'-腺苷酸化糖 - 磷酸酯的BER中间体的方法。 这个新协议补充了我们以前的出版物。 所使用的细胞系是来自具有Oclomotor Apraxia 1型（AOA1）疾病患者，野生型和APTX无效DT40鸡B细胞和小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）细胞的共济失调的野生型和APTX缺陷型人淋巴母细胞。 这个协议是一个快速和有效的方式来制作脊椎动物细胞提取没有使用商业套件。
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