| Determination of Reduced and Total Glutathione Content in Extremophilic Microalga Galdieria phlegrea
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Glutathione is an important molecule involved in the primary and secondary metabolism of all organisms. The Glutathione redox status is an indicator of the cellular redox state. Therefore, it is important to have precise methods on hand to determine the glutathione redox status in the cell. In this protocol, we describe an improved spectrophotometric method to estimate the content of reduced (GSH) and oxidized (GSSG) forms of glutathione in the extremophilic microalga Galdieria phlegrea.
[摘要] 谷胱甘肽是涉及所有生物体的初级和次级代谢的重要分子。 谷胱甘肽氧化还原状态是细胞氧化还原状态的指标。 因此，重要的是要有精确的方法来确定细胞中的谷胱甘肽氧化还原状态。 在本协议中，我们描述了一种改进的分光光度法，用于估计极地微藻Galdieria phlegrea中还原（GSH）和氧化（GSSG）形式的谷胱甘肽的含量。
【背景】谷胱甘肽（γ-L-谷氨酰基-L-半胱氨酰 - 甘氨酸）是存在于所有已知生物体中的必需三肽，其范围从细菌到人类（Frendo等人，2013）。它涉及到几种不同的细胞保护作用（图1）。谷胱甘肽被认为是具有氧化还原信号功能的优异的抗氧化分子。它还参与对非生物和生物胁迫的反应，并涉及细胞的初级代谢（C，N，S代谢）（Noctor et al。，2012;Hernándezet al。 ，2015; Salbitani等人，2015）。
＆NBSP;在植物细胞中，还原型和氧化形式的谷胱甘肽（GSH / GSSG）之间的比例在信号传导和许多防御机制的激活中起重要作用（Foyer和Noctor，2012; Salbitani等人， ，2015）。通常严格控制的GSH / GSSG氧化还原状态可能在应力条件下瞬时转向稍微氧化的值（Tausz等人，2004）。
＆NBSP;在过去，一些研究人员已经开发和修改了分光光度法来确定几种生物体中的GSH和GSSG（Anderson，1985; ...
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| Analyses of Root-secreted Acid Phosphatase Activity in Arabidopsis
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Induction and secretion of acid phosphatase (APase) is a universal adaptive response of higher plants to low-phosphate stress (Tran et al., 2010). The intracellular APases are likely involved in the remobilization and recycling of phosphate (Pi) from intracellular Pi reserves, whereas the extracellular or secreted APases are believed to release Pi from organophosphate compounds in the rhizosphere. The phosphate starvation-induced secreted APases can be released into the rhizosphere or retained on root surfaces (root-associated APases). In this article, we describe the protocols for analyzing root-secreted APase activity in the model plant Arabidopsis thaliana (Arabidopsis). In Arabidopsis, the activity of both root-associated APases and APases that are ...
[摘要] 酸性磷酸酶（APase）的诱导和分泌是高等植物对低磷酸盐胁迫的普遍适应性反应（Tran et al。，2010）。细胞内APase可能参与磷酸盐（Pi）从细胞内Pi储备的再利用和再循环，而细胞外或分泌的APase被认为从根际中的有机磷酸盐化合物中释放出Pi。磷酸盐饥饿诱导的分泌的APase可以释放到根际中或保留在根表面（根相关的APase）上。在本文中，我们描述了在拟南芥（Arabidopsis thaliana）（拟南芥）中分析根分泌的APase活性的方案。在拟南芥中，释放到根际的根系相关APase和APase的活性可以基于它们切割合成底物，释放黄色产物的对硝基苯基磷酸（pNPP）的能力来定量，对硝基苯酚（pNP）（Wang等，2011和2104）。根系相关的APase活性也可以通过将显色底物5-溴-4-氯-3-吲哚基 - 磷酸酯（BCIP）施用到根表面来直接显现（Lloyd等人，2001; Tomscha et al。 ，2004; Wang等人，2011和2014），而释放到根际中的APase的同功酶可以使用凝胶内测定法（Trull和Deikman，1998; Tomscha等人，2004; Wang等人， 2011年和2014年）。之前已经描述了用于分析拟南芥细胞内APase活性的方案（Vicki和William，2013）。
【背景】磷酸盐（Pi）是植物通过根系发生磷的主要形式，大多数土壤中的Pi水平较低，导致Pi饿。为了应对这种营养压力，植物引发了一系列适应性反应，增加了其生存和增长。 ...
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| Measurement of the Galactanase Activity of the GanB Galactanase Protein from Bacillus subtilis
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] The activity of the endo-β-1,4-galactanase GanB from B. subtilis on the high molecular weight β-1,4-galactan was determined quantitatively by the measurement of the increase of the reducing power or with the dyed substrate Azo-galactan. The generated degradation products were analyzed using thinlayer-chromatography (TLC) or high-performance anion-exchange chromatography (HPAEC).
[摘要] 来自B的内切-β-1,4-半乳糖苷酶GanB的活性。 通过测量还原力的增加或染色底物偶氮半乳聚糖来定量测定高分子量β-1,4-半乳聚糖上的枯草芽孢杆菌。 使用薄层色谱（TLC）或高效阴离子交换层析（HPAEC）分析产生的降解产物。
枯草芽孢杆菌具有用于植物细胞壁多糖的综合系统，包括编码半乳聚糖利用元素的基因簇ganSPQAB（Watzlawick等人，2016）。 半乳聚糖是高分子量半乳糖，并且在果胶中被认为是I型鼠李糖半乳糖醛酸的侧链。 其降解通过内切β1,4半乳聚糖酶（EC 3.2.1.89）进行。 半乳聚糖的利用。 枯草芽孢杆菌涉及细胞外半乳聚糖酶GanB，裂解链内的高分子半乳聚糖，并产生进入细胞壁的短的低聚物进一步降解。 来自的 ganB 基因。 枯草芽孢杆菌在大肠杆菌（Watzlawick等人，2016）中克隆并表达，纯化的His标记的成熟蛋白的酶学性质由 半乳聚糖酶测定。
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