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Nuova Stirring Hotplates

NuovaTM Stirring Hotplates

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: SP18425Q
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Company-protocol()
Other protocol()

Immunofluorescence Analysis of Human Endocervical Tissue Explants Infected with Neisseria gonorrhoeae
Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract]  Colonization and penetration of the epithelium is the infection-initiating route of mucosal pathogens. The epithelium counteracts infection by eliciting host cell responses while maintaining the mucosal barrier function. The obligate human sexually transmitted bacterium Neisseria gonorrhoeae, or gonococcus (GC) infects the female reproductive tract primarily from the endocervical epithelium. Due to lack of an infection model that mimics all aspects of human infections in the female reproductive tract, GC pathogenesis is poorly understood. This protocol takes advantage of the viability and functional integrity of human cervical tissues propagated in culture to generate an ex vivo infection model. This tissue model maintains the nature of the infection target and ... [摘要]  上皮的定植和穿透是粘膜病原体的感染启动途径。 上皮细胞通过引发宿主细胞应答来抵抗感染,同时维持粘膜屏障功能。 专性人类性传播细菌淋病奈瑟氏球菌或淋球菌属(GC)主要从宫颈内膜上皮感染女性生殖道。 由于缺乏模仿女性生殖道人类感染的各个方面的感染模型,GC发病机制知之甚少。 该方案利用培养物中繁殖的人宫颈组织的生存力和功能完整性来产生体外感染模型。 这种组织模型保持了感染目标和环境的性质,而没有任何操作,如病毒永生化上皮细胞。 使用免疫荧光显微镜,分析GC与子宫颈上皮细胞的相互作用。


【背景】淋病奈瑟菌(GC)感染人类生殖器上皮,引起淋病,一种常见的性传播感染。女性感染可导致严重的并发症,如盆腔炎,引起输卵管瘢痕和堵塞,易发生异位妊娠或不孕。由于抗生素耐药菌株的流行率增加,淋病又成为重要的公共卫生问题。由于人类是GC的唯一宿主,因此缺乏模仿人类感染各个方面的感染模型是推进我们对GC发病机理的理解的主要障碍。我们建立了人宫颈组织外植体模型和免疫荧光显微镜分析来检测GC感染妇女GC感染的主要部位人间宫颈细胞的机制。这种体外模型保持了宫颈上皮细胞的正常细胞构筑和组织完整性。使用这种模型和免疫荧光分析,我们表明,气相色氨酸定居和渗透到子宫颈组织,在那里他们可能导致症状和播散性淋球菌感染。 ...

Extracellular Axon Stimulation
Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract]  This is a detailed protocol explaining how to perform extracellular axon stimulations as described in Städele and Stein, 2016. The ability to stimulate and record action potentials is essential to electrophysiological examinations of neuronal function. Extracellular stimulation of axons traveling in fiber bundles (nerves) is a classical technique in brain research and a fundamental tool in neurophysiology (Abbas and Miller, 2004; Barry, 2015; Basser and Roth, 2000; Cogan, 2008). It allows for activating action potentials in individual or multiple axons, controlling their firing frequency, provides information about the speed of neuronal communication, and neuron health and function. [摘要]  这是一个详细的协议,说明如何执行细胞外轴突刺激,如Städele和Stein,2016所述。刺激和记录动作电位的能力对神经元功能的电生理检查至关重要。 在纤维束(神经)中行进的轴突的细胞外刺激是脑研究中的一种经典技术,也是神经生理学的基础工具(Abbas和Miller,2004; Barry,2015; Basser和Roth,2000; Cogan,2008)。 它允许在单个或多个轴突中激活动作电位,控制其发射频率,提供关于神经元通信速度以及神经元健康和功能的信息。
【背景】细胞外轴突刺激引起动作电位(AP),而不需要将电极引入神经元。该方案描述了阴极刺激,其使用静息神经元的膜电位为负,而细胞外周围为正的事实。需要两个电极:(1)放置在轴突附近的刺激电极(阴极)和(2)置于浴中的参比电极(阳极)。当激活时,刺激电极向轴突的外部添加电子,从而增加负电荷。这使得轴突的外侧不太积极,因此减小神经元内外的潜在差异。结果是轴突内部局部去极化。如果数量足够,这会引起AP。引发的AP起始于靠近刺激电极并沿着轴突双向传播。
引起AP所需的阈值电流取决于几个参数,包括(1)轴突直径(较粗略的轴突首先被去极化),(2)刺激电极和轴突之间的距离,以及(3)刺激幅度和持续时间。持续时间必须限制在少于AP的持续时间以防止神经元膜变得难治性。因此,通常使用阈值幅度的短电流脉冲来引出各个AP。由于在较低的刺激振幅下招募较厚的轴突,所以如果感兴趣的轴突是神经中最大直径的轴突,则细胞外刺激效果最好。如果靶向较小的轴突,则需要较大的刺激振幅,除了感兴趣的较小轴突之外,还可以首先激活较大的轴突。 ...

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