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Date:
2017-03-05
[Abstract] Aequorin is a Ca2+ sensitive photoprotein suitable to measure intracellular Ca2+ transients in mammalian cells. Thanks to recombinant cDNAs expression, aequorin can be specifically targeted to various subcellular compartments, thus allowing an accurate measurement of Ca2+ uptake and release of different intracellular organelles. Here, we describe how to use this probe to measure cytosolic Ca2+ levels and mitochondrial Ca2+ uptake in mammalian cells.
[摘要] 水母发光蛋白是适合于测量哺乳动物细胞内细胞内Ca 2+ 2+瞬态的Ca 2+。由于重组cDNA表达，水母发光蛋白可以特异性靶向各种亚细胞区室，从而可以准确测量不同细胞内细胞器的Ca 2+摄取和释放。在这里，我们描述了如何使用这种探针来测量哺乳动物细胞中的胞质Ca 2+ / +和/或线粒体Ca 2+。
水母发光蛋白是一种21KDa的光稳定蛋白，其分离自在Ca 2+（2+）存在下发出蓝色光的水母维多利亚水母。在其活性形式中，光蛋白包括脱辅基蛋白和共价结合的假体组，称为肠糜嗪。载脂蛋白包含四个螺旋 - 环 - 螺旋“EF手”结构域，其中三个是Ca 2 + - 结合位点。这些结构域赋予蛋白质特定的球状结构，形成适应肠溶纤维素的疏水性核心腔。当Ca 2 + 离子结合到三个高亲和力EF手部位时，coelenterazine不可逆地被氧化成coelenteramide，同时释放CO 2和发光（Head 等人，2000）。＆nbsp;当编码光蛋白的cDNA被克隆时，水母发酵开始被广泛使用，从而打开重组表达的方式。特别地，重组水母发光蛋白不仅可以在细胞质中表达，而且可以在单个细胞内区室中表达，通过在工程化的cDNA中包括特异性靶向序列（Hartl et al。，1989）。为了扩大可以监测的Ca 2 + ...
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