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FisherbrandTM Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5mL

Fisherbrand TM高级微量离心管:1.5mL

Company: Fisher Scientific
Catalog#: 05-408-129
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Company-protocol()
Other protocol()

HIVGKO: A Tool to Assess HIV-1 Latency Reversal Agents in Human Primary CD4+ T Cells
Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract]  While able to suppress HIV replication in HIV infected individuals, combination antiretroviral therapy (ART) fails to eliminate viral latent reservoir, which consists in integrated transcriptional silenced HIV provirus. So far, identification of latently-infected cells has relied on activating cells to induce expression of HIV proteins which can then be detected. Unfortunately, this activation significantly changed the cell phenotype. We developed a novel HIV reporter, named HIVGKO, that allows the purification of latently-infected cells in absence of reactivation. Indeed, latent cells can be identified by expression of the EF1a-driven mKO2 and lack of expression of the LTR-driven csGFP. This protocol can be used to study the effectiveness of LRAs (Latency Reversal Agents) in ... [摘要]  虽然能够抑制HIV感染个体中的HIV复制,但联合抗逆转录病毒疗法(ART)无法消除病毒潜伏性储库,其包含整合的转录沉默的HIV原病毒。 到目前为止,潜伏感染细胞的鉴定依赖于激活细胞以诱导HIV蛋白的表达,然后可以检测到这些蛋白的表达。 不幸的是,这种激活显着改变了细胞表型。 我们开发了一种名为HIV GKO 的新型HIV报告基因,可以在没有再激活的情况下纯化潜伏感染的细胞。 实际上,可以通过EF1a驱动的mKO2的表达和LTR驱动的csGFP的缺乏表达来鉴定潜伏细胞。 该方案可用于研究LCA(潜伏期逆转剂)在原代细胞中重新激活潜伏HIV的有效性。

【背景】新版双标记病毒(HIV GKO )含有5'LTR中HIV-1启动子控制下的密码子转换eGFP(csGFP)和一种独特的无关荧光蛋白 mKO2在细胞延伸因子αα启动子(EF1α)的控制下。 当使用与遗传相关的荧光蛋白时,由于重组问题,在这些报道分子中使用不相关的荧光蛋白是很重要的。 因此,生产性感染的细胞主要是csGFP + mKO2 + (有些可能只是GFP + ),而潜伏感染的细胞是csGFP - mKO2 + 。 流式细胞仪如分拣机AriaII允许纯化纯感染人群(生产性,潜伏性和/或未感染),而分析仪LSRII允许评估HIV GKO LTR的转录激活。 感染后的时间很短。

Microfluidics-Based Analysis of Contact-dependent Bacterial Interactions
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract]  Bacteria in nature live in complex communities with multiple cell types and spatially-dependent interactions. Studying cells in well-mixed environments such as shaking culture tubes or flasks cannot capture these spatial dynamics, but cells growing in full-fledged biofilms are difficult to observe in real time. We present here a protocol for observing time-resolved, multi-species interactions at single-cell resolution. The protocol involves growing bacterial cells in a near monolayer in a microfluidic device. As a demonstration, we describe in particular observing the dynamic interactions between E. coli and Acinetobacter baylyi. In this case, the protocol is capable of observing both contact-dependent lysis of E. coli by A. baylyi via the Type VI ... [摘要]  自然界中的细菌生活在具有多种细胞类型和空间依赖性相互作用的复杂社区中。 在充分混合的环境中研究细胞,例如摇动培养管或烧瓶,不能捕获这些空间动力学,但是在完全成熟的生物膜中生长的细胞难以实时观察。 我们在这里提出了一种用于观察单细胞分辨率下的时间分辨,多物种相互作用的方案。 该方案涉及在微流体装置中以近单层生长细菌细胞。 作为演示,我们特别描述了观察 E之间的动态相互作用。 大肠杆菌和 Acinetobacter baylyi 。 在这种情况下,该方案能够观察 E的接触依赖性裂解。 大肠杆菌由 A。 baylyi 通过VI型分泌系统(T6SS)和随后的来自 E的基因的功能性水平基因转移(HGT)。 大肠杆菌到 A.baylyi。

【背景】 不同种类细菌之间的空间依赖性相互作用可能在自然界普遍存在,但它们很难观察到。一个例子是通过天然感受的捕食性DNA受体细胞的接触依赖性,原位裂解作为DNA供体的捕食细胞来增强水平基因转移(HGT)。这种情况最近才出现在革兰氏阴性菌中,但已经在多个物种中观察到,并且它被认为是一种相对普遍的现象(Borgeaud et al。,2015; Cooper 等人,,2017; Veening和Blokesch,2017; Ringel et ...

Long-term in vitro Culture of Cryptosporidium parvum
Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract]  Continuous in vitro growth of Cryptosporidium parvum has proved difficult and conventional in vitro culture techniques result in short-term (2-5 days) growth of the parasite resulting in thin-walled oocysts that fail to propagate using in vitro cultures, and do not produce an active infection using immunosuppressed or immunodeficient mouse models (Arrowood, 2002). Here we describe the use of hollow fiber bioreactors (HFB) that simulate in vivo conditions by providing oxygen and nutrients to host intestinal cells from the basal surface and permit the establishment of a low redox, high nutrient environment on the apical surface. When inoculated with 105 C. parvum (Iowa isolate) oocysts the bioreactor produced 108 ... [摘要]  Cryptosporidium parvum 的连续体外生长已证明是困难的,并且常规体外培养技术导致短期(2-5天)生长寄生虫导致薄壁卵囊不能使用体外培养物繁殖,并且不使用免疫抑制或免疫缺陷小鼠模型产生活跃感染(Arrowood,2002)。在这里,我们描述了中空纤维生物反应器(HFB)的使用,通过提供氧气和营养物质从基础表面宿主肠细胞模拟体内条件,并允许建立低氧化还原,高营养环境顶面。当接种10 5 C时。 parvum (爱荷华州分离物)卵囊生物反应器在14天后每ml产生10个 8 卵囊(20ml额外毛细血管体积),并保持2年以上。使用TCR-α免疫缺陷小鼠模型的体内感染性研究显示,在6,12和18个月时从生物反应器产生的卵囊与用于启动培养的亲本Iowa分离物无法区分。 HFB产生的卵囊具有与亲本爱荷华分离物类似的百分比分析。

【背景】 Cryptosporidium parvum 是人和其他哺乳动物肠道的细胞内专性寄生虫,导致急性腹泻。该疾病在免疫功能正常的个体中是自限性的,然而,在免疫功能低下的成人和幼儿中,该疾病可能危及生命(Kotloff,2017)。它是经济资源低的国家中三种被诊断出的儿童肠道疾病之一(Kotloff et al。,2013; Sow et ...

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