| Automated Analysis of Cerebrospinal Fluid Flow and Motile Cilia Properties in The Central Canal of Zebrafish Embryos
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Author:
Date:
2021-03-05
[Abstract] Circulation of cerebrospinal fluid (CSF) plays an important role during development. In zebrafish embryo, the flow of CSF has been found to be bidirectional in the central canal of the spinal cord. In order to compare conditions and genetic mutants across each other, we recently automated the quantification of the velocity profile of exogenous fluorescent particles in the CSF. We demonstrated that the beating of motile and tilted cilia localized on the ventral side of the central canal was sufficient to generate locally such bidirectionality. Our approach can easily be extended to characterize CSF flow in various genetic mutants. We provide here a detailed protocol and a user interface program to quantify CSF dynamics. In order to interpret potential changes in CSF flow profiles, we ...
[摘要] [摘要]脑脊液（CSF）的循环在发育过程中起着重要的作用。在斑马鱼胚胎中，已发现脑脊液在脊髓中央管中是双向流动的。为了相互比较条件和遗传突变体，我们最近自动化了CSF中外源性荧光颗粒速度分布的定量。我们证明了位于中央管腹侧的运动性和倾斜纤毛的跳动足以产生局部这种双向性。我们的方法可以很容易地扩展以表征各种遗传突变体中的脑脊液流动。我们在此提供详细的协议和用户界面程序，以量化CSF动态。为了解释CSF流量曲线中的潜在变化，我们提供了其他工具来测量中央管直径，表征纤毛动力学并将实验数据与我们的理论模型进行比较，以评估纤毛对在中央管中产生体积力的影响。我们的方法也可用于测量体内的粒子速度并在各种生物溶液中模拟流量。
[背景]在斑马鱼胚胎中，从受精后24小时（hpf）开始在脊髓中央管中观察到脑脊液（CSF）的流动（Sternberg等，2018 ； Cantaut-Belarif等，2018 ）和更高版本。延伸到脑室（Olstad等人，2019）。在胚胎中央管中，CSF双向流动：朝向腹侧的尾巴和朝向背侧的头（Sternberg等人，2018; Cantaut-Belarif等人，2018; Thouvenin等人，2020）。这种双向性是由极化活动性纤毛的跳动引起的，该纤毛主要在中央管的腹侧区域中活动，从而驱动腹侧区域中的流体向尾端定向运动，并在背侧区域产生逆流。 ...
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| Fabrication and Use of the Dual-Flow-RootChip for the Imaging of Arabidopsis Roots in Asymmetric Microenvironments
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] This protocol provides a detailed description of how to fabricate and use the dual-flow-RootChip (dfRootChip), a novel microfluidic platform for investigating root nutrition, root-microbe interactions and signaling and development in controlled asymmetric conditions. The dfRootChip was developed primarily to investigate how plants roots interact with their environment by simulating environmental heterogeneity. The goal of this protocol is to provide a detailed resource for researchers in the biological sciences wishing to employ the dfRootChip in particular, or microfluidic devices in general, in their laboratory.
[摘要] 该协议提供了如何制造和使用双流RootChip（dfRootChip）的详细描述，这是一种新型微流体平台，用于研究根管营养，根 - 微生物相互作用以及受控不对称条件下的信号传导和发育。 dfRootChip的开发主要是为了研究植物根系如何通过模拟环境异质性与环境相互作用。 该协议的目标是为希望在其实验室中特别使用dfRootChip或一般微流体装置的生物科学研究人员提供详细资源。
【背景】地下条件是高度异质和动态的，因此植物根部暴露于各种刺激，因此必须适应这种复杂的环境。尽管这些发展适应的重要性，但潜在的机制仍有待阐明。微流体装置已被证明可用于在受控的微环境中培养标本，并有助于从亚细胞到有机物水平的动态过程的实时成像（Crane 等人，，2010）。由于微流体可以以受控方式操纵小流体体积，以高通量进行实验，提取定量信息并进行延时测量，微流体装置已经进入了有机体研究。对于模式植物拟南芥，已经开发了一系列微流体装置，能够在根发育过程中监测基因表达（Busch et al。，2012），信号事件（Keinath et al。，2015）和基于传感器的营养摄取成像（Grossmann et al。，2011; Lanquar et al。， 2014）。此外，使用微流体平台的最新进展包括高分辨率表型分析（Jiang et al。，2014; Xing ...
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| Primary Cultures from Human GH-secreting or Clinically Non-functioning Pituitary Adenomas
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Pituitary adenomas are among the more frequent intracranial tumors usually treated with both surgical and pharmacological–based on somatostatin and dopamine agonists–approaches. Although mostly benign tumors, the occurrence of invasive behaviors is often detected resulting in poorer prognosis. The use of primary cultures from human pituitary adenomas represented a significant advancement in the knowledge of the mechanisms of their development and in the definition of the determinants of their pharmacological sensitivity. Moreover, recent studies identified also in pituitary adenomas putative tumor stem cells representing, according to the current hypothesis, the real cellular targets to eradicate most malignancies. In this protocol, we describe the procedure to establish primary cultures ...
[摘要] 垂体腺瘤是更常见的颅内肿瘤之一，通常用基于生长抑素和多巴胺激动剂手术的手术和药物治疗。 虽然多为良性肿瘤，但侵入性行为的发生常常被检测到，导致预后较差。 来自人类垂体腺瘤的原代培养物的使用代表了对其发育机制的知识以及其药理敏感性决定因素的定义方面的显着进步。 此外，最近的研究也在垂体腺瘤中发现了假定的肿瘤干细胞，根据目前的假设，它代表了根除大多数恶性肿瘤的真实细胞靶标。 在这个协议中，我们描述了从人垂体腺瘤建立原代培养的程序，以及如何选择，体外扩增和表型鉴定推定的垂体腺瘤干细胞。
【背景】垂体腺瘤是最常见的颅内肿瘤之一（高达15％），横断面研究发现每100,000名居民中约有90例发病，其中绝大多数为30岁以上的成年人。大约10％的未经选择的垂体在尸检时进行了检查（即考虑到之前未诊断为垂体疾病的受试者的垂体）（ ，Molitch，2017）。尽管通常为良性肿瘤，但垂体腺瘤的处理可因与激素分泌过多相关的临床综合征或发展以治疗抗性，高增殖率，快速复发和绒毛外侵袭为特征的侵袭行为而复杂化（Carreno等人，2017）。成年垂体干细胞的持续存在（Florio，2011）导致垂体腺瘤（以及可能的其他良性瘤形成）的发展可以源自具有干细胞特性（主要是自我更新和分化）的肿瘤细胞的亚群能力），正如已经建立的恶性固体和血液肿瘤一样。
最近的实验证据表明，癌症干细胞（CSC）范例也适用于人和小鼠垂体腺瘤（Donangelo等人，2014; ...
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