| Producing GST-Cbx7 Fusion Proteins from Escherichia coli
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] This protocol describes the production of GST-Cbx7 fusion proteins from E. coli, originally developed in the recent publication (Zhen et al., 2016). The pGEX-6P-1-GST plasmids encoding the Cbx7 variants were transformed into BL21 competent cells. The fusion protein production was induced by isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside and they were purified by Glutathione Sepharose 4B. This protocol can be adapted for the purification of other proteins.
[摘要] 该方案描述了最近在最近的出版物（Zhen等，2016）中开发的大肠杆菌GST-Cbx7融合蛋白的生产。 将编码Cbx7变体的pGEX-6P-1-GST质粒转化到BL21感受态细胞中。 通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导融合蛋白的产生，并用谷胱甘肽琼脂糖4B纯化。 该方案可以适用于其他蛋白质的纯化。
【背景】Polycomb组（PcG）蛋白通过调节高阶染色质结构调节基因表达（Kerppola，2009; Simon和Kingston，2013）。 PcG蛋白通常存在于两种主要复合物Polycomb镇压复合物（PRC）1和2（Kerppola，2009; Simon和Kingston，2013）中。 PRC2是甲基转移酶，其催化组蛋白H3（H3K27me2 / 3）上赖氨酸27的二甲基和三甲基化（Cao等，2002）; PRC1是在赖氨酸119（H2AK119Ub）上单核苷酸组氨酸H2A的泛素连接酶（Wang等，2004）。哺乳动物PRC1复合物进一步分为典型和变体PRC1（Gao等，2012，Tavares等，2012）。规范PRC1由每个Ring1（Ring1A / Ring1B），Pcgf（Mel18 / Bmi1），Phc（Phc1 / 2/3）和Cbx（Cbx2 / 4/6/7/8）蛋白之一组成。 ...
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| Isolation, Culturing, and Differentiation of Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Myogenesis is a multi-step process that leads to the formation of skeletal muscle during embryonic development and repair of injured myofibers. In this process, myoblasts are the main effector cell type which fuse with each other or to injured myofibers leading to the formation of new myofibers or regeneration of skeletal muscle in adults. Many steps of myogenesis can be recapitulated through in vitro differentiation of myoblasts into myotubes. Most laboratories use immortalized myogenic cells lines that also differentiate into myotubes. Although these cell lines have been found quite useful to delineating the regulatory mechanisms of myogenesis, they often show a great degree of variability depending on the origin of the cells and culture conditions. Primary myoblasts have been ...
[摘要] 造血是一种多步骤过程，导致在损伤的肌纤维的胚胎发育和修复期间骨骼肌的形成。在这个过程中，成肌细胞是主要的效应细胞类型，彼此融合或损伤肌纤维，导致新成肌纤维的形成或成年人骨骼肌的再生。通过体外成骨细胞分化成肌管可以概括出许多发生肌肉发育的步骤。大多数实验室使用也分化成肌管的永生化肌原细胞系。虽然已经发现这些细胞系对于描绘造血的调节机制非常有用，但是它们通常依赖于细胞的来源和培养条件而显示出很大的变异性。原代成肌细胞被认为是体外研究肌生成的最生理学相关模型。然而，由于成体骨骼肌的丰度低，原代成肌细胞的分离在技术上是有挑战性的。在本文中，我们描述了一种用于从小鼠的成年骨骼肌分离原代成肌细胞的改进方案。我们还描述了其培养和分化成肌管的方法。
背景 造血是一个复杂而高度协调的过程，其涉及多潜能中胚层细胞的测定，以产生成肌细胞，成肌细胞从细胞周期中排出，以及它们最终分化为骨骼肌纤维。 Myogen-5，MyoD，myogenin和MRF4的基因螺旋 - 环 - 螺旋转录因子的一组基因调控因子（MRFs）的顺序表达调控。 Myf-5和MyoD是成肌细胞形成，增殖和存活所需的主要MRFs，而其他MRF（如肌细胞生成素和MRF-4）在肌发生过程中起作用迟发，激活收缩蛋白和其他结构和代谢蛋白的基因表达（白金汉，2003; ...
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| 3D Stroma Invasion Assay
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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] We have developed a 3D co-culture system composed of fibroblasts and colorectal cancer cells that enables us to study the desmoplastic reaction. This method also enables us to study the influence of the desmoplastic reaction on the migration of colorectal cancer cells through the surrounding stroma. This protocol has been previously published (Coulson-Thomas et al., 2011) and is described here in more detail.
[摘要] 我们开发了一种由成纤维细胞和结肠直肠癌细胞组成的3D共培养系统，使我们能够研究脱发反应。这种方法还使我们能够研究脱发反应对结肠直肠癌细胞通过周围基质的迁移的影响。以前已经公布了该协议（Coulson-Thomas等人，2011），并且在此更详细地描述。
背景 癌症的进展依赖于癌细胞和周围细胞如成纤维细胞，炎性细胞和内皮细胞之间的复杂的串扰，其形成癌症微环境。成纤维细胞是主要的细胞外基质产生细胞并且负责组织的结构形成。肿瘤周围的成纤维细胞被癌细胞“激活”成肿瘤相关成纤维细胞（TAFs），并在肿瘤发生和转移中发挥关键作用。在一些癌症中，TAF上调细胞外基质表达，产生一种主要由胶原纤维和蛋白多糖组成的无组织基质，其影响癌细胞增殖，迁移和扩散。这被称为脱发反应，并且在癌细胞生长期间，不同的肿瘤可能表现出各种等级的发育不良。
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