|
Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] Peripheral blood mononuclear cell (PBMC) isolation is commonly done via density gradient centrifugation over Ficoll-Hypaque, a labor-intensive procedure that requires skilled technicians and can contribute to sample variability. Cellular Preparation Tubes (CPTs) are Vacutainer blood draw tubes that contain Ficoll-Hypaque and a gel plug that separates the Ficoll solution from the blood to be drawn. Once blood is drawn into CPTs, they can be centrifuged to separate the PBMC, then shipped (if desired) to a processing lab. The processing lab removes the PBMC from the upper compartment of the tube (above the gel plug), washes the PBMC, and can cryopreserve them using DMSO-containing media, as detailed in this protocol.
[摘要] 外周血单核细胞（PBMC）分离通常通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心来进行，Ficoll-Hypaque是一种劳动密集型程序，需要熟练的技术人员并且可以有助于样品变异性。细胞制备管（CPT）是含有Ficoll-Hypaque的Vacutainer采血管和将Ficoll溶液与待吸取血液分离的凝胶塞。一旦血液吸入CPT，就可将其离心分离PBMC，然后运送（如果需要）到加工实验室。处理实验室从管的上部隔室（凝胶塞上）除去PBMC，洗涤PBMC，并可以使用含DMSO介质冷冻保存，如本方案所述。
背景 外周血单核细胞（PBMC）的分离和低温保存在采用细胞免疫测定的临床研究中是常见的做法。冷冻保存允许样品的批量化，这是方便的并且提高了数据的可比性。冷冻保存还允许将细胞存储在将来未知的未知目的。因为红细胞和粒细胞比冻融融化要脆弱得多，所以PBMC分离是血液细胞冷冻保存的常见先决条件。 PBMC分离最常见的方法是使用高分子量碳水化合物溶液Ficoll-Hypaque进行密度梯度离心。
＆nbsp;含有Ficoll-Hypaque的细胞制备管（CPT）以两种方式简化了密度梯度离心的标准方法：（1）将血液收集到同一管中，然后用于分离PBMC;和（2）管预装有Ficoll-Hypaque，其由凝胶塞分离，使得其不会被血液进入管中的干扰。抽血后，离心管，PBMC和血浆通过凝胶塞与红细胞和粒细胞分离（见图1）。这样可以运送纺丝管，将PBMC保持在与红细胞和粒细胞分离的环境中，这可以提高其生存力和功能。 ...
|