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Date:
2017-02-05
[Abstract] The anaerobic, gastrointestinal pathogen, Clostridium difficile, persists within the environment and spreads from host-to-host via its infectious form, the spore. To effectively study spore formation, the physical differentiation of vegetative cells from spores is required to determine the proportion of spores within a population of C. difficile. This protocol describes a method to accurately enumerate both viable vegetative cells and spores separately and subsequently calculate a sporulation frequency of a mixed C. difficile population from various in vitro growth conditions (Edwards et al., 2016b).
[摘要] 厌氧，胃肠道病原体，艰难梭菌在环境中持续存在，并通过其感染形式，孢子从宿主到宿主传播。为了有效地研究孢子形成，需要从孢子中进行营养细胞的物理分化以确定在C群体内孢子的比例。艰难的。该方案描述了分别精确地枚举活的营养细胞和孢子的方法，并随后计算混合的孢子形成频率。来自各种体外生长条件（Edwards等人，2016b）的难治性群体。
背景 孢子形成是一个复杂的发育过程，导致代谢休眠孢子的形成。 C的物理性质。艰难的孢子形式提供了许多环境胁迫和消毒剂的内在抵抗，允许其在宿主之外的长期生存（参见：Paredes-Sabja等人，2014年）。区分营养细胞和C孢子。已经开发了利用孢子的物理和抗性属性的各种技术，包括短时间暴露于湿热或乙醇（Burns等人，2010; Lawley＆amp; et al。，2010; Edwards等人，2014）。然而，根据C的应变，这些技术可能不经意地对孢子造成长期损害。难以测试，导致恢复率不准确。在这里，我们描述了使用比以前描述的较低浓度的乙醇（40％以下的乙醇）的优化方法以消除异质C中的所有营养细胞。艰难梭菌群体，而不降低孢子的生存力。该技术为量化C提供了高度可重现性和较不可变的结果。难产孢子孢子形成。
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