250 ml Sorvall metal rotor tubes

Company: Thermo Fisher Scientific

Catalog#: 522

Preparation and Purification of β-1,3-glucan-Linked Candida glabrata Cell Wall Proteases by Ion-Exchange Chromatography, Gel Filtration, and MDPF-Gelatin-Zymography Assay

Pirjo Pärnänen, Timo Sorsa, Taina Tervahartiala and Pirjo Nikula-Ijäs

Published online: 2024-03-20

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Protein Expression Protocol for an Adenylate Cyclase Anchored by a Vibrio Quorum Sensing Receptor

Author:

Stephanie Beltz and Joachim E. Schultz,

Date:

2017-01-20

[Abstract] The direct regulation of a mycobacterial adenylate cyclase (Rv1625c) via exchange of its membrane anchor by the quorum sensing receptor CqsS (Vibrio harveyi) has recently been reported (Beltz et al., 2016). This protocol describes the expression and membrane preparation for these chimeric proteins. [摘要] 最近报道了通过其群岛感应受体CqsS（Vibrio harveyi）交换其膜锚定点直接调节分枝杆菌腺苷酸环化酶（Rv1625c）（Beltz等，2016）。该方案描述了这些嵌合蛋白的表达和膜制备。
【背景】膜分隔的哺乳动物腺苷酸环化酶（AC）是IIIa类AC。调节是间接通过第一信使细胞外刺激G蛋白偶联受体（GPCR）而在细胞内释放的刺激（或抑制性）Gα-蛋白。 AC产生使用ATP作为底物的通用第二信使cAMP。脊椎动物AC中两个六角膜结构域的大小远远超过了对简单膜锚固的要求。然而，这种内在的膜锚定/受体结构域的调节特征是未知的。为了研究潜在的功能，选择了可以容易地在细菌中表达的分类细菌的典型类IIIa AC Rv1625c（Guo等人，2001和2005）与哺乳动物AC同工型相反。我们用来自哈维氏弧菌CqsS的六价体积感知（QS）受体的受体结构域取代了Rv1625c AC的六角膜锚，以检查我们是否可以通过QS配体的霍乱自动诱导剂直接调节AC -1'，CAI-1。 QS受体和IIIa类膜锚的设计是非常相似的，即最小的跨膜α-螺旋和极短的连接环。
我们已经证明了通过细胞外信号直接调节IIIa ...

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