| Myeloid Progenitor Transformation Assay
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Numerous oncogenes have been identified to cause leukemia. For example, chromosomal translocation generates various fusion genes of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene and a partner gene in leukemia, whose gene products transform primary myeloid progenitors into an immortalized state. To characterize the transforming ability of leukemic oncogenes, researchers in the field have developed an ex vivo murine myeloid transformation assay using retroviral gene transduction and its protocol has been improved over the past 10 years. Here, we provide the detailed procedure for this assay.
[摘要] 许多致癌基因已被确定为导致白血病。 例如，染色体易位在白血病中产生混合谱系白血病（MLL ）基因和伴侣基因的各种融合基因，其基因产物将原始骨髓祖细胞转化为永生状态。 为了表征白血病癌基因的转化能力，本领域的研究人员已经利用逆转录病毒基因转导开发了一种离体小鼠骨髓转化试验，其方案在过去的10年中得到了改进。 在这里，我们提供了这个检测的详细程序。
【背景】染色体易位产生多种导致白血病的MLL融合基因（Meyer等人，2017）。野生型混合谱系白血病（MLL）蛋白质起着转录调节剂的作用，其在造血不成熟祖细胞中增强包括同源框（homoxox（Hox））基因在内的一组基因的表达（Jude等。，2007）。在正常造血期间，Hox基因在干/祖细胞部分中表达，但在分化过程中转录下调（Somervaille和Cleary，2006; Yokoyama等人， 2013年）;然而，MLL融合蛋白组成性地上调其靶基因并阻断分化以在离体培养条件下建立永生状态。最近，我们报道了MLL-ENL和MLL-AF10融合蛋白招募AF4以激活转录并且还募集DOT1L复合物以维持相同靶基因的转录以有效地转化造血祖细胞（Okuda等人， ...
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| In vivo Leukemogenesis Model Using Retrovirus Transduction
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Various genetic alterations such as chromosomal translocation cause leukemia. For examples, gene rearrangements of the mixed-lineage leukemia (MLL) gene generate MLL fusion genes, whose products are potent oncogenic drivers in acute leukemia. To better understand the mechanism of disease onset, several murine leukemia models using retroviral gene transduction, xenograft, or Cre-mediated chromosomal translocation have been developed over the past twenty years. Particularly, a retroviral gene transduction-mediated murine leukemia model has been frequently used in the leukemia research field. Here, we describe the detailed protocol for this model.
[摘要] 各种基因改变如染色体易位导致白血病。 例如，混合谱系白血病（MLL ）基因的基因重排产生MLL 融合基因，其产物是急性白血病中有效的致癌驱动因子。 为了更好地理解疾病发生的机制，过去二十年来已经开发了几种使用逆转录病毒基因转导，异种移植或Cre介导的染色体易位的鼠白血病模型。 特别地，逆转录病毒基因转导介导的鼠白血病模型已经在白血病研究领域中经常使用。 在这里，我们描述这个模型的详细协议。
【背景】基因重排产生混合谱系白血病（MLL ）融合基因，导致高度侵袭性的急性白血病。 MLL重排往往伴随着少量额外的遗传改变和不良的临床结果（Andersson等人，2015）。野生型MLL增强和维持包括同源框（Hox）基因在内的一部分基因的表达，以刺激未成熟祖细胞的扩增（Jude等人，2007年）。在未成熟的祖细胞/干细胞组分中，Hoxa9和emis1的表达最高，但随着细胞分化逐渐下降，并最终在终末分化的细胞组分中减少（Somervaille和Cleary，2006; Yokoyama et al。 ，2013）。 MLL融合蛋白组成性地上调包括Hoxa9和Meis1在内的靶基因的表达，使未成熟的祖细胞永生化，并在体内引起白血病 （Ayton和Cleary，2003; ...
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| Determination of Local pH Differences within Living Salmonella Cells by High-resolution pH Imaging Based on pH-sensitive GFP Derivative, pHluorin(M153R)
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The bacterial flagellar type III protein export apparatus is composed of a transmembrane export gate complex and a cytoplasmic ATPase complex. The export apparatus requires ATP hydrolysis and the proton motive force across the cytoplasmic membrane to unfold and transport flagellar component proteins for the construction of the bacterial flagellum (Minamino, 2014). The export apparatus is a proton/protein antiporter that couples the proton flow with protein transport through the gate complex (Minamino et al., 2011). A transmembrane export gate protein, FlhA, acts as an energy transducer along with the cytoplasmic ATPase complex (Minamino et al., 2016). To directly measure the proton flow through the FlhA channel that is coupled with the flagellar protein export, we have ...
[摘要] 细菌鞭毛III型蛋白质输出装置由跨膜出口门复合物和胞质ATP酶复合物组成。出口设备需要ATP水解和跨细胞质膜的质子动力来展开和转运鞭毛成分蛋白以构建细菌鞭毛（Minamino，2014）。出口设备是质子/蛋白质反向转运体，其将质子流与通过门络合物的蛋白质转运相结合（Minamino等，2011）。跨膜输出门蛋白FlhA与胞质ATP酶复合物一起作为能量转导（Minamino等，2016）。为了直接测量通过与鞭毛蛋白输出相结合的FlhA通道的质子流，我们开发了具有高空间和pH分辨率的体内pH成像系统（Morimoto等，2016）。在这里，我们描述了我们如何测量生活沙门氏菌细胞出口设备附近的局部pH（Morimoto et al。，2016）。我们的方法可以应用于广泛的活细胞。由于局部pH值是监测活细胞活性的最重要参数之一，因此我们的方案将广泛应用于生命科学的各个领域。
【背景】已经检测到跨膜质子通道复合物的质子通道活性是细菌细胞的细胞质pH降低（Morimoto等，2010; Che等，2014; Furukawa等，2017）。然而，为了详细测量活细胞中膜复合物的质子通道活性，需要精确测量局部细胞质pH。绿色荧光蛋白（GFP）的衍生物，pHluorin，激发波长为410和470 nm，发射于508 nm是测量活细胞胞质pH值的有用探针（Miesenböcket ...
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