| Teratoma Formation Assay for Assessing Pluripotency and Tumorigenicity of Pluripotent Stem Cells
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Pluripotent stem cells such as induced pluripotent stem cells (iPSCs) and embryonic stem cells (ESCs) form teratomas when transplanted into immunodeficient mice. As teratomas contain all three germ layers (endoderm, mesoderm, ectoderm), teratoma formation assay is widely used as an index of pluripotency (Evans and Kaufman, 1981; Hentze et al., 2009; Gropp et al., 2012). On the other hand, teratoma-forming tumorigenicity also represents a major risk factor impeding potential clinical applications of pluripotent stem cells (Miura et al., 2009; Okano et al., 2013). Recently, we reported that iPSCs derived from naked mole-rat lack teratoma-forming tumorigenicity when engrafted into the testes of non-obese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) ...
[摘要] 多能干细胞，如诱导多能干细胞（iPSCs）和胚胎干细胞（ESC），当移植到免疫缺陷小鼠时，形成畸胎瘤。由于畸胎瘤包含所有三个胚层（内胚层，中胚层，外胚层），畸胎瘤形成测定被广泛用作多能性的指标（Evans和Kaufman，1981; Hentze等，2009; Gropp等，2012）。另一方面，畸胎瘤形成致瘤性也是阻碍多能干细胞潜在临床应用的主要危险因素（Miura et al。，2009; Okano等，2013）。最近，我们报道了由于ES细胞表达的Ras（ERAS）和替代物，嫁接到非肥胖型糖尿病/严重联合免疫缺陷型（NOD / SCID）小鼠的睾丸中，从裸鼠睾丸衍生的iPSC缺乏畸胎瘤形成致瘤性阅读框（ARF）依赖于该物种特异性的肿瘤抑制机制（Miyawaki等，2016）。在这里，我们描述了将多能干细胞移植到NOD / SCID小鼠的睾丸中以产生用于评估多能性和致瘤性的畸胎瘤的方法。
【背景】iPSCs和ESC用于再生医学细胞移植治疗中的应用。然而，当移植到免疫缺陷小鼠中时，这些细胞形成称为含有分化组织的畸胎瘤的肿瘤。因此，其畸胎瘤形成致瘤性的风险限制了其临床应用。几项研究报道了克服畸胎瘤形成肿瘤发生风险的方法（Itakura et al。，2017; Vazquez-Martin et ...
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| Efficient AAV-mediated Gene Targeting Using 2A-based Promoter-trap System
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Adeno-associated virus (AAV)-based targeting vectors have 1-4-log higher gene targeting efficiencies compared with plasmid-based targeting vectors. The efficiency of AAV-mediated gene targeting is further increased by introducing a promoter-trap system into targeting vectors. In addition, we found that the use of ribosome-skipping 2A peptide rather than commonly used internal ribosome entry site (IRES) in the promoter-trap system results in significantly higher AAV-mediated gene targeting efficiencies (Karnan et al., 2016). In this protocol, we describe the procedures for AAV-mediated gene targeting exploiting 2A for promoter trapping, including the construction of a targeting vector based on the platform plasmid pAAV-2Aneo or pAAV-2Aneo v2, production of AAV particles, infection ...
[摘要] 与基于质粒的靶向载体相比，基于腺相关病毒（AAV）的靶向载体具有1-4对较高的基因靶向效率。 通过将启动子捕获系统引入靶向载体中，AAV介导的基因靶向的效率进一步增加。 此外，我们发现使用核糖体跳跃2A肽而不是通常使用的内部核糖体进入位点（IRES）在启动子捕获系统中导致显着更高的AAV介导的基因靶向效率（Karnan等，2016）。 在该方案中，我们描述了AAV介导的基因靶向开发2A用于启动子捕获的程序，包括基于平台质粒pAAV-2Aneo或pAAV-2Aneo v2的靶向载体的构建，AAV颗粒的产生，细胞感染 基于AAV的靶向载体，以及基因靶向细胞克隆的分离和验证。
【背景】以前在其他方案中描述了AAV介导的基因靶向的程序（对应于本方案的BG部分）（Kohli等人，2004; Rago等人，2007; Khan等人，2011; Howes and Schofield ，2015）。 然而，该方案提供了如何使用基于2A的启动子捕获系统首次进行AAV介导的基因靶向的详细描述。
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