| Extraction and Molybdenum Blue-based Quantification of Total Phosphate and Polyphosphate in Parachlorella
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Inorganic phosphorus is a non-renewable resource and an essential element for life on Earth. Organisms such as algae, protists, and animals can store phosphate (Pi) through uptake of Pi as polyphosphate (poly-P), which is a linear polymer of orthophosphate residues linked by high-energy phosphoanhydride bonds. Here, we describe procedures for extraction of total phosphate and poly-P from Parachlorella cells and quantification of orthophosphate based on molybdenum blue assay. The present method may be applicable for other microalgae.
[摘要] 无机磷是一种不可再生资源，是地球上生命的基本要素。 诸如藻类，原生生物和动物之类的生物体可以通过摄取作为多磷酸（poly-P）的Pi来储存磷酸盐（poly-P），聚磷酸盐是通过高能量磷酸酐键连接的正磷酸盐残基的线性聚合物。 在这里，我们描述了从Parachlorella细胞中提取总磷酸盐和poly-P以及基于钼蓝测定定量正磷酸盐的方法。 本方法可适用于其他微藻类。
【背景】生物磷回收是一种特别有吸引力的营养物回收形式。 藻类可以积聚磷酸盐（Pi），并且富含Pi的藻类生物质可用作生物肥料（Solovchenko等，2016）。 在以前的研究中，Ota等人 （2016）揭示了Parachlorella kessleri中硫缺乏（-S）条件下的电子密实体与聚P动力学的关系。 伞藻属于Trebouxiophyceae属的绿藻属，其特征在于刚性细胞壁和无性，不运动的生命周期。 这里提出的方案允许从小球藻提取总Pi和多磷酸（poly-P），并且基于钼蓝反应定量无机磷，这是用于定量正磷酸盐的标准方法。 Nagul等人先前回顾了钼蓝反应的理论背景。（2015年）。
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| Measurement of ATP Hydrolytic Activity of Plasma Membrane H+-ATPase from Arabidopsis thaliana Leaves
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Plant plasma membrane H+-ATPase, which is a P-type ATPase, couples ATP hydrolysis to H+ extrusion and thereby generates an electrochemical gradient across the plasma membrane. The proton gradient is necessary for secondary transport, cell elongation, and membrane potential maintenance. Here we describe a protocol for measurement of the ATP hydrolytic activity of the plasma membrane H+-ATPase from Arabidopsis thaliana leaves.
[摘要] 作为P型ATP酶的植物质膜H sup + -ATPase将ATP水解耦合到H + +/- 挤出，从而在质膜上产生电化学梯度。质子梯度对于二次转运，细胞伸长和膜电位维持是必需的。这里我们描述用于测量来自拟南芥叶片的质膜H + -ATPase的ATP水解活性的方案。
关键词： strong> 拟南芥，ATP水解活性，原钒酸盐，P-型ATP酶，血浆膜H + -ATPase
质膜H + -ATPase活性的测定对于阐明其功能和调节机制是重要的。然而，有时难以确定质膜H sup + -ATP酶的ATP水解活性，因为植物细胞含有许多ATP水解酶。该协议是基于Uemura和Yoshida（1986）和Kinoshita等人的出版物开发的。 （1995）。我们使用KNO 3作为V型ATP酶的抑制剂，钼酸铵作为酸性磷酸酶的抑制剂，寡霉素作为F型ATP酶的抑制剂，NaF作为磷酸酶的抑制剂（Shimazaki和Kondo ，1987; Kinoshita等人，1995）。原钒酸盐抑制P型ATP酶，并且因此可以通过评估来自ATP水解的钒酸盐敏感性P 1释放来用于测量质膜H sup + -ATP酶的活性。释放的P 1与钼酸盐反应形成蓝色络合物，然后可以通过测量在750nm的吸收来量化。
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