|
Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] Müller cells are the major supportive and protective glial cells across the retina. Unlike in fish, they have lost the capacity to regenerate the retina in mammals. But, mammalian Müller cells still retain certain retinal stem cell properties with various degree of self-renewal and differentiation potentials, and thereby held a merit in cell-based therapies for treating retinal degeneration diseases. In our laboratory, we use an enzymatic procedure to isolate, purify, and culture mouse Müller cells.
[摘要] Müller细胞是视网膜上的主要支持和保护性胶质细胞。 与鱼类不同，它们已经失去了在哺乳动物中再生视网膜的能力。 但是，哺乳动物Müller细胞仍然保留了具有不同程度的自我更新和分化潜能的某些视网膜干细胞特性，从而在基于细胞的疗法中治疗视网膜变性疾病具有优点。 在我们的实验室，我们使用酶法来分离，纯化和培养小鼠Müller细胞。
【背景】Müller胶质细胞是视网膜的主要谱系，其功能是通过神经营养因子的合成，神经递质的摄取和再循环，离子的空间缓冲和血液视网膜屏障的维持来维持视网膜稳态（Bringmann等人，，2006; De Melo Reis等人，2008）。 Müller神经胶质细胞作为鱼类中的视网膜祖细胞和干细胞，在有限的范围内作为鸟类（Vihtelic和Hyde，2000; Fischer and Reh，2001）。但是，哺乳动物Müller细胞已经失去了再生视网膜的能力，尽管仍然保留成体干细胞的某些性质，例如视网膜损伤时的增殖。研究恢复哺乳动物Müller细胞丧失能力以修复视网膜损伤和理解底层机制的研究在与模型动物视网膜分离的原代细胞的实验室进行。蛋白水解酶广泛用于Müller细胞解离，木瓜蛋白酶的损伤较小，比其他蛋白酶更有效。 ...
|
|
Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] The process of protein ubiquitination typically consists of three sequential steps to add an ubiquitin (Ub) or Ub chain to a substrate protein, requiring three different enzymes, ubiquitin activating enzyme (E1), ubiquitin conjugating enzyme (E2), and ubiquitin protein ligase (E3). Most E2s possess the classical E2 activity in forming E2-Ub complex through a thioester linkage, in presence of an E1 and Ub. Additionally, some E2s have the ability of catalyzing the formation of free Ub dimer. Such activity indicates an important role of these E2s in ubiquitination pathway. Thus, we developed an in vitro Ub dimer formation assay to determine the activity of certain E2s. Moreover, by using Ub mutants, in which different lysine residues are mutated, the specific linkage of dimer can ...
[摘要] 蛋白质泛素化的过程通常包括三个顺序步骤：向底物蛋白添加泛素（Ub）或Ub链，需要三种不同的酶，泛素活化酶（E1），泛素缀合酶（E2）和泛素蛋白连接酶E3）。大多数E2在E1和Ub的存在下具有通过硫酯键形成E2-Ub复合物的经典E2活性。另外，一些E2具有催化游离Ub二聚体形成的能力。这种活性表明这些E2在泛素化途径中的重要作用。因此，我们开发了体外的Ub二聚体形成测定来确定某些E2的活性。此外，通过使用不同赖氨酸残基突变的Ub突变体，也可以确定二聚体的特异性连接。
背景 E2共轭启动试验（不添加E3和底物）的现有方案旨在检测硫酯键（E2-S-Ub）。我们的方法着重于催化游离Ub二聚体形成（Ub-Ub）的E2活性。提供了一种检测不同物种E2重要生化特征的便捷方式。此外，二聚体的特异性连接可以通过使用不同的Ub突变体来确定。
|