| Cell Synchronization by Double Thymidine Block
|
|
Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Cell synchronization is widely used in studying mechanisms involves in regulation of cell cycle progression. Through synchronization, cells at distinct cell cycle stage could be obtained. Thymidine is a DNA synthesis inhibitor that can arrest cell at G1/S boundary, prior to DNA replication. Here, we present the protocol to synchronize cells at G1/S boundary by using double thymidine block. After release into normal medium, cell population at distinct cell cycle phase could be collected at different time points.
[摘要] 细胞同步广泛用于研究涉及细胞周期进程调节的机制。 通过同步，可以获得不同细胞周期阶段的细胞。 胸苷是一种DNA合成抑制剂，可在DNA复制前阻止细胞在G1 / S边界。 在这里，我们提出了使用双胸苷阻滞同步G1 / S边界细胞的协议。 释放到正常培养基中后，可以在不同的时间点收集不同细胞周期阶段的细胞群。
【背景】细胞周期和细胞分裂是细胞生物学的核心。为了构建多细胞生物体，细胞复制对于产生可以执行特定功能的特化细胞是必需的。正常细胞周期由间期（G1期，S期和G2期）和有丝分裂期（M期）组成（Rodríguez-Ubreva et al。，2010;Léger et al。 ，2016）。在间期期间，遗传物质被复制并使一切为有丝分裂做好准备。然而，在有丝分裂期，重复的染色体被分离并分配到子细胞中（Sakaue-Sawano 等人，，2008）。
为了精确保存遗传信息，必须严格控制细胞周期进程。细胞周期蛋白/ CDK复合物通过在各自阶段快速促进活动来控制细胞周期进展，并且当它们的阶段完成时迅速失活（Graña和Reddy，1995）。
细胞同步对于研究细胞周期调节事件特别有用。使用不同的方法，细胞可以在不同的细胞周期阶段同步。治疗作为微管形成抑制剂的诺考达唑可以使细胞处于G2 / M期同步（Ho et ...
|
|
|
| Murine Leukemia Virus (MLV)-based Coronavirus Spike-pseudotyped Particle Production and Infection
|
|
Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Viral pseudotyped particles (pp) are enveloped virus particles, typically derived from retroviruses or rhabdoviruses, that harbor heterologous envelope glycoproteins on their surface and a genome lacking essential genes. These synthetic viral particles are safer surrogates of native viruses and acquire the tropism and host entry pathway characteristics governed by the heterologous envelope glycoprotein used. They have proven to be very useful tools used in research with many applications, such as enabling the study of entry pathways of enveloped viruses and to generate effective gene-delivery vectors. The basis for their generation lies in the capacity of some viruses, such as murine leukemia virus (MLV), to incorporate envelope glycoproteins of other viruses into a pseudotyped virus ...
[摘要] 病毒假型颗粒（pp）是包膜病毒颗粒，通常来自逆转录病毒或弹状病毒，在其表面上携带异源性包膜糖蛋白和缺乏必需基因的基因组。这些合成的病毒颗粒是天然病毒的更安全的替代品并且获得由所使用的异源性包膜糖蛋白控制的嗜性和宿主进入途径特征。它们已被证明是用于具有许多应用的研究中非常有用的工具，例如使得能够研究包膜病毒的进入途径并产生有效的基因递送载体。它们的产生的基础在于一些病毒如鼠白血病病毒（MLV）的能力，以将其他病毒的包膜糖蛋白掺入假型病毒颗粒中。这些可以被工程化以包含报道基因例如荧光素酶，使得能够在易感细胞的假型粒子感染时定量病毒进入事件。在这里，我们详细说明使用中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）尖峰（S）作为待并入的异源包膜糖蛋白的实例，能够产生基于MLV的假型包装颗粒的方案。我们还描述了这些颗粒如何用于感染易感细胞并通过荧光素酶测定进行定量感染性读数。
关键词：假型颗粒，鼠白血病病毒，包膜糖蛋白，冠状病毒，
[背景] ...
|
|
|