| Behavioral Assays to Study Oxygen and Carbon Dioxide Sensing in Caenorhabditis elegans
|
|
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract] Animals use behavioral strategies to seek optimal environments. Population behavioral assays provide a robust means to determine the effect of genetic perturbations on the ability of animals to sense and respond to changes in the environment. Here, we describe a C. elegans population behavioral assay used to measure locomotory responses to changes in environmental oxygen (O2) and carbon dioxide (CO2) concentrations. These behavioral assays are high-throughput and enable examination of genetic, neuronal and circuit function.
[摘要] 动物使用行为策略来寻求最佳的环境。 人口行为分析提供了一个强大的手段来确定遗传扰动对动物感知和响应环境变化的能力的影响。 在这里，我们描述一个 C。 elegans 人群行为测定用于测量对环境氧（O 2）和二氧化碳（CO 2）浓度变化的运动反应。 这些行为测定法是高通量的并且能够检查遗传，神经元和电路功能。
【背景】氧浓度提供了C。线虫与环境条件有关的信息。在实验室条件下，当呈现O 2梯度时，C。线虫向中等浓度（2％-12％）迁移（Gray等人，2004）。低水平的O 2可以指示细菌（食物）的存在，而高O 2水平可能意味着蠕虫靠近其环境基质的表面。因此，C。 elegans 以极其敏感的方式对O 2浓度的变化作出反应，使得能够导航到有利于后代存活和繁殖的最佳环境（Gray等人， 2004; Chang等人，2006; Zimmer等人，2009）。同样，蠕虫对CO 2的变化也有强烈的行为反应。喂食良好的动物避免CO 2而饥饿的动物被吸引到CO 2（Hallem和Sternberg，2008）。这种响应的变化可能提供寻找食物的进化优势，因为细菌食物来源释放CO 2。此外，病原体产生CO 2 2，这可能表明为什么喂食良好的蠕虫避免CO 2 2。特定的神经元调节气体感应反应。包括头部神经元URXL / R，BAGL / ...
|
|
|
| Culturing Bacteria from Caenorhabditis elegans Gut to Assess Colonization Proficiency
|
|
Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Determining an accurate count of intestinal bacteria from Caenorhabditis elegans is one critical way to assess colonization proficiency by a given bacteria. This can be accomplished by culturing appropriate dilutions of worm gut bacteria on selective or differential agarized media. Because of the high concentration of bacteria in gut worm, dilution is necessary before plating onto growth media. Serial dilutions can reduce the concentration of the original intestinal sample to levels low enough for single colonies to be grown on media plates, allowing for the calculation of the initial counts of bacteria in the intestinal sample.
[摘要] 从秀丽隐杆线虫确定肠道细菌的准确计数是评估给定细菌的定殖能力的关键方法之一。 这可以通过在选择性或差异琼脂培养基上培养适当稀释的蠕虫细菌来实现。 由于肠蠕虫中细菌的浓度高，因此稀释必须在生长培养基上。 连续稀释可以将原始肠样品的浓度降低到足够低的浓度，使单个菌落生长在培养基平板上，从而计算肠样品中细菌的初始计数。
【背景】动物很少分离生活，但与微生物有关。主要与微生物之间的共生关系是Rosentberg和Zilber-Rosenberg在2011年的共生关系。在哺乳动物中，宿主 - 微生物共生相互作用主要发生在粘膜表面，最重要的是肠粘膜。当从野生新鲜分离时，线虫通常在其肠腔内容纳多种细菌菌群，使人联想到高等生物的微生物群落（Duveau和Felix，2012; Bumbarger等，2013）。相比之下，在实验室中，秀丽隐杆线虫通常保持在单一细菌菌株的存在下（Brenner，1974）。大多数情况下，这是革兰氏阴性细菌大肠杆菌。然而，有时使用其他物种，例如革兰氏阳性枯草芽孢杆菌（Garsin等，2003）。成虫蠕虫含有大约10,000个细菌细胞，比宿主蠕虫体细胞数量高10倍（Portal-Celhay和Blaser，2012）：或许巧合的是，这种微生物群与宿主细胞的比例与人类发现的相似。
正在使用不同的策略来测量秀丽隐杆线虫的细菌如异硫氰酸荧光素（FITC）标记的细菌，表达融合报告基因的细菌（绿色荧光蛋白[GFP]或β-半乳糖苷酶））的定殖能力。然而，更准确的方法是测量从蠕虫肠分离出的CFU的数量。在本协议中，我们展示了如何分离和计数秀丽隐杆线虫的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌菌株。在枯草芽孢杆菌的情况下，我们还展示了如何区分营养形式与秀丽隐杆线虫内部这种细菌形成的高度抗性孢子。 ...
|
|
|
| Measuring Oxidative Stress in Caenorhabditis elegans: Paraquat and Juglone Sensitivity Assays
|
|
Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Oxidative stress has been proposed to be one of the main causes of aging and has been implicated in the pathogenesis of many diseases. Sensitivity to oxidative stress can be measured by quantifying survival following exposure to a reactive oxygen species (ROS)-generating compound such as paraquat or juglone. Sensitivity to oxidative stress is a balance between basal levels of ROS, the ability to detoxify ROS, and the ability to repair ROS-mediated damage.
[摘要] 已经提出氧化应激是老化的主要原因之一，并且已经涉及许多疾病的发病机理。对氧化应激的敏感性可以通过量化暴露于活性氧（ROS） - 生成化合物如百草枯或胡桃酮后的存活来测量。对氧化应激的敏感性是ROS的基础水平，ROS解毒能力和修复ROS介导的损伤的能力之间的平衡。
背景 已经使用许多方法来测试秀丽隐杆线虫中的氧化应激的敏感性，包括接触百草枯，胡桃碱，t-BOOH，亚砷酸盐，H 2 O 2 O 2或高压氧（Keith等人，2014）。所有这些测定用于将蠕虫中的ROS水平提高到生存降低的程度。蠕虫暴露于（例如，超氧化物，过氧化氢），暴露速率（急性与慢性）和认为受影响最严重的亚细胞区域（ROS）的主要类型不同，百草枯主要在线粒体中增加超氧化物水平（Castello et al。，2007）。基于这些差异，特定的蠕虫菌株可能表现出增加的敏感性或在一个测定中增加的抗氧化应激，但在另一个测定中没有显示出差异。蠕虫菌株也可能在一个年龄对氧化应激敏感，但在不同的时间对该氧化应激的相同形式有抗性因此，为了获得对特定菌株对氧化应激敏感性的充分了解，有必要在不同时间点使用多种测定法。
|
|
|