{{'Search' | translate}}
 

Dulbecco’s modified Eagle’s medium

DMEM

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 41966-052
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Isolation of Microvascular Endothelial Cells
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. Murine endothelial cell culture is an important tool for cardiovascular disease research. This protocol demonstrates a quick, efficient method for the isolation of microvascular endothelial cells from murine tissues without any special equipment. To isolate endothelial cells, the lung or heart were mechanically minced and enzymatically digested with collagenase and trypsin. The single cell suspension obtained was then incubated with an anti-CD31, anti-CD105 antibody and with biotinylated isolectin B-4. The endothelial cells were harvested using magnetic bead separation with rat anti-mouse Ig- and streptavidin-conjugated microbeads. Endothelial cells were ... [摘要]  血管内皮是正常血管稳态所必需的。其功能障碍参与各种心血管疾病。小鼠内皮细胞培养是心血管疾病研究的重要工具。该协议演示了一种快速,有效的方法从小鼠组织中分离微血管内皮细胞而无需任何特殊设备。为了分离内皮细胞,将肺或心脏机械切碎并用胶原酶和胰蛋白酶进行酶促消化。然后将获得的单细胞悬浮液与抗CD31,抗CD105抗体和生物素化的异凝集素B-4温育。使用大鼠抗小鼠Ig-和链霉亲和素缀合的微珠,使用磁珠分离收获内皮细胞。扩张内皮细胞并收集用于随后的分析。这些培养物的形态和表型特征在培养10代以上保持稳定。在任何阶段没有过度生长的非内皮来源的污染细胞。

【背景】微血管内皮细胞通过调节白细胞再循环和作为T淋巴细胞的抗原呈递细胞而在免疫应答的发展中起中心作用。内皮的良好状态对血管稳态很重要。功能失调的内皮参与各种心血管疾病,包括动脉粥样硬化,血管炎和缺血/再灌注损伤(Cid et al。,2004; Wang等人,2007)。因此,体外培养的内皮细胞培养物是研究血管生理学和疾病病理学的重要工具。然而,分离原代鼠类内皮细胞被认为是特别困难的,因为大多数描述的方案涉及用消化酶灌注器官或大血管和耗时的纯化过程(Gumkowski等人,1987) 。

该协议的目的是提供一种简单的方法,不需要使用任何特殊设备即可从肺/心脏中分离和扩展内皮细胞。使用这种方法,我们以前补充了体内研究,证明了CD31信号传导在内皮细胞细胞保护中的重要性(Cheung等人,2015年)。 ...

Relative Stiffness Measurements of Cell-embedded Hydrogels by Shear Rheology in vitro
Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract]  Hydrogel systems composed of purified extracellular matrix (ECM) components (such as collagen, fibrin, Matrigel, and methylcellulose) are a mainstay of cell and molecular biology research. They are used extensively in many applications including tissue regeneration platforms, studying organ development, and pathological disease models such as cancer. Both the biochemical and biomechanical properties influence cellular and tissue compatibility, and these properties are altered in pathological disease progression (Cox and Erler, 2011; Bonnans et al., 2014). The use of cell-embedded hydrogels in disease models such as cancer, allow the interrogation of cell-induced changes in the biomechanics of the microenvironment (Madsen et al., 2015). Here we report a simple method to ... [摘要]  由纯化的细胞外基质(ECM)组分(如胶原,纤维蛋白,Matrigel和甲基纤维素)组成的水凝胶系统是细胞和分子生物学研究的支柱。它们广泛用于许多应用,包括组织再生平台,研究器官发育和病理疾病模型如癌症。生物化学和生物力学性质都影响细胞和组织相容性,并且这些性质在病理疾病进展中发生改变(Cox和Erler,2011; Bonnans等人,2014)。在诸如癌症的疾病模型中使用细胞嵌入的水凝胶允许询问细胞诱导的微环境生物力学变化(Madsen等人,2015)。在这里,我们报告一种使用受控应变旋转流变仪测量这些细胞诱导的体外变化的简单方法。

背景 纤维化和实体瘤伴随着其天然组织的病理重塑(Cox和Erler,2011; Bonnans等人,2014)。在两种病理状况下,局部组织环境经历物理化学和生物学变化,导致组织刚度(弹性模量)增加(Humphrey等人,2014)。增强的组织/基质调节导致细胞行为改变,细胞形态,分化状态,增殖,迁移和干性的机械信号。在癌症的临床前动物模型中,这些变化可以驱动恶性进展和转移性扩散(Bonnans等人,2014)。不足为奇的是,靶基质硬化近年来受到了极大的关注,几项临床试验已经开始(Kai等人,2016)。
 基质组分的弹性和机械性能可以使用原子力显微镜(AFM)进行检查,原子力显微镜(AFM)是一种提供纳米分辨率并以picoNewton分辨率同时测量施加力的技术(Kasas和Dietler,2008)。然而,AFM不适用于理解较大的3D矩阵的弹性特性。使用剪切流变学可以更精确地检查体积3D矩阵的机械性能(Picout和Ross-Murphy,2003)。流变学是研究当施加力时材料如何变形。因此,将剪切应力施加到3D矩阵可以确定体积3D矩阵的弹性模量(刚度)。在该方案中,我们描述了一种通过剪切流变学测量细胞诱导的与癌相关成纤维细胞嵌入的水凝胶的基质刚度变化的方法。 ...

Comments