| Tumorigenicity Assay in Nude Mice
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Tumorigenicity refers to the ability of cultured cells to develop viable tumors in immune-deficient animals. The goal of this protocol is to illustrate tumorigenicity assay by subcutaneous tumor-cell-transplantation in nude mice. Target cells are transplanted to 6-week-old nude mice subcutaneously and the tumor growth is monitored over a period of observation or treatment. When tumor grows to a pre-determined size or by the end of the limited period, the nude mice will be euthanatized and the xenograft will be removed for further examination.
[摘要] 致瘤性是指培养的细胞在免疫缺陷型动物中发展活肿瘤的能力。 该方案的目的是通过裸鼠皮下肿瘤细胞移植来说明致瘤性测定。 将靶细胞皮下移植到6周龄的裸鼠中，并在观察或治疗期间监测肿瘤生长。 当肿瘤生长至预定大小或在有限期结束时，裸鼠将被安乐死，异种移植物将被去除以进一步检查。
【背景】肿瘤发病率高，死亡率高，是导致死亡的主要原因之一，也是一个重大的公共卫生问题。 每年进行广泛的研究，以探索肿瘤发病机制和抗肿瘤治疗。 在癌症研究的过程中，裸鼠中的致瘤性测定是用于监测体内肿瘤生长的广泛使用的实验（Giovanella et al。，1974）。 用于致瘤性测定的最常用的动物系统是无胸腺裸鼠（Petricciani等人，1973），其中恶性细胞可以皮下或肾下 - 荚膜移植（van Meir，1997）。 对于具有相对低致瘤性能力的细胞，通过照射（30-60Gy）或植入Matrigel（Pretlow等人，1991）可以提高摄取率。 致瘤性测定提供了产生人细胞衍生的肿瘤组织用于测量肿瘤细胞恶性肿瘤和评价抗肿瘤药物功效的方法。
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| Soft Agar Colony Formation Assay as a Hallmark of Carcinogenesis
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Soft agar colony formation assay is established to estimate the anchorage-independent growth ability of cells. In this assay, a bottom layer of agar with complete media is poured and solidified first, followed by an upper layer containing a specified number of cells suspended in medium-agar mixture. After two weeks of incubation, the number of colonies will be counted, serving as an indicator of malignancy of tumor cells.
[摘要] 建立软琼脂集落形成测定法来估计细胞的锚定依赖性生长能力。 在该测定中，首先将具有完全培养基的琼脂的底层倾倒并固化，然后将含有特定数量的悬浮于中等琼脂混合物中的细胞的上层。 孵化两周后，将计数菌落数，作为肿瘤细胞恶性肿瘤的指标。
【背景】无固定生长是细胞在固体表面独立生长的能力，被认为是致癌作用的标志（de Larco和Todaro，1978）。软琼脂集落形成测定是评估细胞粘附非依赖性生长以检测恶性细胞的致瘤性潜力的良好方法（Roberts等人，1985），其由Puck等人描述的板集落形成测定。在1956年，细胞接种到培养板上以测定细胞形成菌落的能力（Puck等，1956）。板集落形成测定的局限性在于它仅显示针对锚定依赖性生长的细胞能力，正常细胞可以从其脱离（一种在锚定依赖性细胞脱离周围的细胞外基质时发生的程序性细胞死亡形式）并生存（Taddei等，2012）。相比之下，恶性细胞能够不附着于底物而增殖和生长。因此，开发了软琼脂集落形成测定法来表征体外这种能力（Hamburger and Salmon，1977; Yuan et al。，2017）。软琼脂集落形成实验广泛适用于细胞分化，转化和肿瘤发生的研究以及抗肿瘤治疗的疗效评价。
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| Single Molecule RNA FISH in Arabidopsis Root Cells
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Methods that allow the study of gene expression regulation are continually advancing. Here, we present an in situ hybridization protocol capable of detecting individual mRNA molecules in plant root cells, thus permitting the accurate quantification and localization of mRNA within fixed samples (Duncan et al., 2016; Rosa et al., 2016). This single molecule RNA fluorescence in situ hybridization (smFISH) uses multiple single-labelled oligonucleotide probes to bind target RNAs and generate diffraction-limited signals that can be detected using a wide-field fluorescence microscope. We adapted a recent version of this method that uses 48 fluorescently labeled DNA oligonucleotides (20 mers) to hybridize to different portions of each transcript (Raj et al ...
[摘要] 允许研究基因表达调控的方法不断前进。在这里，我们提出了一种能够检测植物根细胞中单个mRNA分子的原位杂交方案，从而允许mRNA在固定样品内的准确定量和定位（Duncan等人， ，2016; Rosa等人，2016）。这种单分子RNA荧光原位杂交（smFISH）使用多个单标记寡核苷酸探针结合靶RNA并产生可以使用宽场荧光显微镜检测的衍射限制信号。我们调整了该方法的最新版本，该方法使用48个荧光标记的DNA寡核苷酸（20个）与每个转录物的不同部分杂交（Raj等人，2008）。这种方法简单易行，具有很好的应用于任何遗传背景的优点。
虽然已经开发了单分子FISH来定量测量培养细胞，组织切片和整体无脊椎动物生物体的单细胞水平的mRNA，但该方法未被优化用于植物中的单细胞。由于植物组织的内源性自发荧光，植物中的荧光成像是相当有挑战性的。在这里，我们报告一种检测植物中单RNA分子的方法。我们描述在固定的拟南芥根瘤胃细胞内的单一转录物的检测和自动计数。该方法产生隔离的单元和单细胞层，其与红色和远红色染料一起使用可以最大化限制背景噪声的信噪比。
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