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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Efficient delivery of oligonucleotide therapeutics, i.e., siRNAs, to the central nervous system represents a significant barrier to their clinical advancement for the treatment of neurological disorders. Small, endogenous extracellular vesicles were shown to be able to transport lipids, proteins and RNA between cells, including neurons. This natural trafficking ability gives extracellular vesicles the potential to be used as delivery vehicles for oligonucleotides, i.e., siRNAs. However, robust and scalable methods for loading of extracellular vesicles with oligonucleotide cargo are lacking. We describe a detailed protocol for the loading of hydrophobically modified siRNAs into extracellular vesicles upon simple co-incubation. We detail methods of the workflow from ...
[摘要] 将寡核苷酸治疗剂即siRNAs有效递送到中枢神经系统代表了治疗神经系统疾病的临床进展的显着障碍。 小的内源性细胞外囊泡显示能够在细胞（包括神经元）之间传输脂质，蛋白质和RNA。 这种天然的贩运能力使细胞外囊泡成为寡核苷酸即siRNA的递送载体的潜力。 然而，缺乏用寡核苷酸载体装载细胞外囊泡的稳健和可扩展的方法。 我们描述了在简单共孵育后将疏水修饰的siRNA加载到细胞外囊泡中的详细方案。 我们详细介绍了从细胞外囊泡纯化到数据分析的工作流程。 该方法可以促进基于细胞外基于囊泡的疗法用于治疗广泛的神经障碍。
【背景】siRNA是一种类型的寡核苷酸治疗剂，一类新的直接靶向信使RNA（mRNA）的药物，以防止导致疾病表型的蛋白质的表达。 siRNA的治疗应用是非常有希望的，因为siRNA可以被设计为靶向任何基因，包括不能用小分子或基于蛋白质的疗法“可药用”的基因。在寡核苷酸治疗剂的化学中取得的进展使得能够设计完全稳定的疏水改性的siRNA（hsiRNA，用2'-O-甲基或2'-氟以及硫代磷酸酯和共价键合到胆固醇的有义链修饰），其促进细胞hsiRNA的自我内化，并保持有效负载在RNA诱导的沉默复合体（RISC）中的能力（Byrne等，2013; Khvorova和Watts，2017）。与乘客链的3'末端连接的胆固醇缀合物对于快速细胞膜缔合是必需的（Byrne等，2013; ...
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Dengue is a global public health threat caused by infection with any of the 4 related dengue virus serotypes (DENV1-4). Clinical manifestations range from self-limiting febrile illness, known as dengue fever (DF), to life-threatening severe diseases, such as dengue hemorrhagic fever (DHF) or dengue shock syndrome (DSS). Most cases of DHF/DSS are associated with secondary heterotypic infections through a phenomenon that is described as antibody-dependent enhancement of infection (ADE). There are an estimated 400 million human infections and several hundred thousand cases of severe dengue occurring yearly. At present, however, there are no approved antiviral drugs against DENV infection. The lack of a suitable animal model has hampered the evaluation of novel antiviral candidates for DENV ...
[摘要] 登革热是由4种相关登革热病毒血清型（DENV1-4）的任一种感染引起的全球公共卫生威胁。临床表现的范围从自限性发热疾病，称为登革热（DF），到危及生命的严重疾病，如登革热出血热（DHF）或登革热休克综合征（DSS）。大多数DHF/DSS病例通过描述为抗体依赖性增强感染（ADE）的现象与继发性异型感染相关。估计每年有4亿人感染和数十万例严重登革热病例。然而，目前，还没有批准的抗DENV感染的抗病毒药物。缺乏合适的动物模型阻碍了DENV感染的新抗病毒候选物的评价。由于DENV在免疫活性小鼠中不良地建立感染，已将AG129小鼠（缺乏I型和II型IFN [干扰素]受体）和小鼠适应的DENV2株应用于能够繁殖人类感染的几种主要病理的登革动物模型。最近，我们开发了具有临床分离株DENV1和DENV2的新的小鼠模型，其将用于药物测试和登革热发病机理研究（Watanabe等人，2016）。在这里我们描述建立临床分离株的登革热小鼠模型的细节;从体外材料制备到体内病毒感染。值得注意的是，由于DENV在小鼠中的感染性在病毒株之间不同，不是所有临床分离株都可以诱导严重的登革热。
关键字：登革热病毒，致命的小鼠模型，临床病毒，病毒感染的抗体依赖性增强，药物测试
[背景] 为了克服DENV在啮齿动物细胞中不能很好复制的缺点，多年来已经进行了许多努力来开发模拟人类登革热感染的小动物模型。近交小鼠模型系统允许实验可变性最小化，并且遗传工程小鼠模型能够再现动物中登革热临床症状的一些方面。过去的研究显示，用DENV2临床分离物感染的AG129小鼠（缺乏I型和II型IFN受体）感染瘫痪的迹象，这是中枢神经系统受累的病症，在人类病例中是罕见的（Shresta等人。，2004）。或者，产生可在AG129小鼠中诱导人类DHF/DSS样疾病的小鼠适应的DENV2毒株，并已用于登革热研究（Shresta等人，2006; ...
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