| Halo Assay for Toxic Peptides and Other Compounds in Microorganisms
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] We describe an assay for determination of toxicity in S. cerevisiae involving spotting of a toxic peptide on a lawn of yeast cells. This assay may be generalized to determine toxicity of a variety of compounds by substituting a putative toxic compound in place of the peptide. The general protocol may also be used to determine toxicity of any small compound toward another microorganism by replacing S. cerevisiae with the target microbe and modifying growth conditions accordingly.
[摘要] 我们描述了用于测定S中的毒性的测定法。酿酒酵母包括在酵母细胞的菌苔上发现毒性肽。该测定法可以概括为通过用推定的毒性化合物代替肽来测定多种化合物的毒性。一般方案还可以用于通过替换S来确定任何小的化合物对另一种微生物的毒性。酿酒酵母与目标微生物并相应地改变生长条件。
[背景] 二肽/三肽是所有生物体氮，碳和氨基酸的主要来源之一。含有毒性氨基酸残基的合成肽提供了测定酿酒酵母中肽转运和/或利用的实验方法。通过细胞内肽酶或蛋白酶水解内化肽释放毒性残留物，导致在培养皿中铺板的细胞培养板上生长停滞的容易检测的区域（晕轮）。例如，在细胞内水解时，毒性肽Ala-Eth释放乙硫氨酸（Eth），甲硫氨酸拮抗剂干扰氨基酸掺入蛋白质中以及DNA和其它甲基化途径的正常甲基化，从而导致细胞死亡。当点样到酵母细胞的草坪上时，转运的二肽Ala-Eth将抑制生长，并且在含有Eth的有毒肽被点样的区域周围的细胞的细胞壁中形成清晰的"晕"（图1A）。本文描述的用于测定肽中毒性的测定。 （1）可以通过简单地使用推定的有毒化合物代替含有毒性氨基酸的肽来修饰以确定任何底物的毒性，或者（2）其可以被修饰以通过替换S来确定底物对任何微生物的毒性。酿酒酵母在用靶生物的测定中。它是一种简单，廉价和相对快速的方法，用于确定针对特定生物体和所测定的毒性部分修改的底物毒性。
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| Uptake Assay for Radiolabeled Peptides in Yeast
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] We describe an assay for measuring the uptake of radioactive peptides into the yeast Saccharomyces cerevisiae. The methods presented here can be adapted to measure a variety of substrates transported into any bacterial or fungal cell via specific carrier-mediated systems.
[摘要] 我们描述了用于测定S中的毒性的测定法。酿酒酵母包括在酵母细胞的菌苔上发现毒性肽。该测定法可以概括为通过用推定的毒性化合物代替肽来测定多种化合物的毒性。一般方案还可以用于通过替换S来确定任何小的化合物对另一种微生物的毒性。酿酒酵母与目标微生物并相应地改变生长条件。
[背景] 二肽/三肽是所有生物体氮，碳和氨基酸的主要来源之一。含有毒性氨基酸残基的合成肽提供了测定酿酒酵母中肽转运和/或利用的实验方法。通过细胞内肽酶或蛋白酶水解内化肽释放毒性残留物，导致在培养皿中铺板的细胞培养板上生长停滞的容易检测的区域（晕轮）。例如，在细胞内水解时，毒性肽Ala-Eth释放乙硫氨酸（Eth），甲硫氨酸拮抗剂干扰氨基酸掺入蛋白质中以及DNA和其它甲基化途径的正常甲基化，从而导致细胞死亡。当点样到酵母细胞的草坪上时，转运的二肽Ala-Eth将抑制生长，并且在含有Eth的有毒肽被点样的区域周围的细胞的细胞壁中形成清晰的"晕"（图1A）。本文描述的用于测定肽中毒性的测定。 （1）可以通过简单地使用推定的有毒化合物代替含有毒性氨基酸的肽来修饰以确定任何底物的毒性，或者（2）其可以被修饰以通过替换S来确定底物对任何微生物的毒性。酿酒酵母在用靶生物的测定中。它是一种简单，廉价和相对快速的方法，用于确定针对特定生物体和所测定的毒性部分修改的底物毒性。...
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