Ty1 Retrotransposition Frequency Assay Using a Chromosomal Ty1his3AI or Ty1kanMXAI Element
|
Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Here I describe a simple genetic assay to determine the frequency of retrotransposition of a single chromosomal Ty1 element that is marked with the retrotransposition indicator gene, his3AI or kanMXAI. The assay is used to determine the effect of mutations or environmental conditions on the frequency of Ty1 retrotransposition in the yeast, Saccharomyces cerevisiae.
[摘要] 在这里,我描述了一个简单的基因测定,以确定单个染色体Ty1元件的逆转录频率,该元件用逆转录指示基因 his3AI 或 kanMXAI 标记。 该测定用于确定突变或环境条件对酵母中的Ty1逆转录频率的影响, Saccharomyces cerevisiae 。
【背景】Ty1是长末端重复(LTR)反转录转座子,其在结构上和进化上与逆转录病毒相关。当Ty1 RNA在细胞质病毒样颗粒内逆转录时,Ty1的逆转录发生,导致cDNA的合成,转运回细胞核并整合到其宿主的基因组中(Boeke et al。 ,1985; Garfinkel et al。,1985)。整合的Ty1元件包含两个相同方向的LTR,位于两个开放阅读框的侧翼: GAG ,它编码形成病毒样颗粒并结合Ty1 RNA的结构蛋白, POL ,它编码三种酶蛋白 - 蛋白酶,逆转录酶和整合酶(图1)。 Ty1元素是 S中所有五个LTR-反转录转座子家族中最活跃和最丰富的转录。酵母。 Ty1已被证明受数百种基因,几种不同的环境条件和各种DNA损伤剂的调节(Curcio et ...
|
|
Quantitative Measurements of HIV-1 and Dextran Capture by Human Monocyte-derived Dendritic Cells (MDDCs)
|
Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] The aim of this protocol is to describe how to measure and quantify the amount of HIV-1 particles and dextran molecules internalized in human monocyte derived dendritic cells (MDDCs), using three different techniques: flow cytometry, quantitative PCR and confocal microscopy.
[摘要] 本协议的目的是描述如何使用三种不同的技术:流式细胞术,定量PCR和共聚焦显微镜来测量和量化人类单核细胞衍生树突细胞(MDDCs)中内在的HIV-1颗粒和葡聚糖分子的量。 [背景] 开发此协议是为了评估在人单核细胞衍生的树突细胞中肌动蛋白成核破坏时HIV-1内化的变化。在shRNA筛选后,识别对于HIV-1从树突状细胞转移到T细胞重要的基因,我们观察到肌动蛋白成核的中断导致从富含肌动蛋白的树突到水泡的转变,由于过量的肌动球蛋白收缩。结果,观察到HIV-1转移的减少和由于水泡收缩驱动的巨噬细胞增多引起的HIV-1内化的增加。我们的结论是,肌动蛋白成核和稳定的效应器是维持艾滋病毒1对肌动蛋白丰富的树突和限制其内吞作用,有效转移到T淋巴细胞的关键(Menager和Littman,2016)。
|
|