| In vitro Assay to Assess Efficacy of Potential Antiviral Compounds against Enterovirus D68
|
|
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] In 2014 enterovirus D68 (EV-D68) caused the largest outbreak in the United States since the discovery of the virus. Distinct from before, the 2014 infections were associated with more severe respiratory disease and occasional neurological complications. So far, there are no available vaccines or antivirals for the prophylaxis or treatment of EV-D68 infections. In order to evaluate the antiviral activity of potential inhibitors of EV-D68 replication, a cell-based cytopathic effect (CPE) reduction assay was developed (Sun et al., 2015).
[摘要] 2014年肠病毒D68（EV-D68）自发现病毒以来，在美国引起了最大的爆发。与之前不同的是，2014年感染与更严重的呼吸道疾病和偶尔的神经系统并发症有关。到目前为止，还没有可用的疫苗或抗病毒药物用于预防或治疗EV-D68感染。为了评估EV-D68复制潜在抑制剂的抗病毒活性，开发了基于细胞的细胞病变效应（CPE）降低测定法（Sun等，2015）。
背景 作为新出现的病原体，以前很少报道靶向EV-D68的抗病毒化合物。迫切需要建立和开发抗病毒方法来对抗潜在的EV-D68流行病。在这里，我们报告一个详细的方案，可用于识别选择性抗EV-D68化合物。为了筛选和鉴定潜在的抗病毒化合物，基于MTS的CPE降解测定法是可重复使用的，易于使用和省时的方法，被广泛使用。该方法依赖于化合物抑制EV-D68诱导的CPE降低的能力。当化合物主动抑制EV-D68的复制时，病毒诱导的CPE将被减少或不存在。因此，代谢活性细胞能够将黄色四唑盐底物（MTS / PMS）转化为棕色甲an制品。当化合物不具有抗病毒作用时，宿主细胞死于病毒诱导的CPE，其将缺乏代谢活性，并且黄色底物保持未代谢。比色转化是定量的，因为可以从该测定产生的数据计算EC 50。
|
|
|
| Cation (Ca2+ and Mn2+) Partitioning Assays with Intact Arabidopsis Chloroplasts
|
|
Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Determination of the relative distribution of Ca2+ and Mn2+ is an important tool for analyzing mutants showing altered levels of calcium and/or manganese transporters in the chloroplast envelope or thylakoid membrane. The method described in this protocol allows quantitative analyses of the relative distribution of calcium and manganese ions between chloroplast stroma and thylakoids using the isotopes [45Ca] and [54Mn] as radioactive tracers. To avoid contaminations with non chloroplastidic membrane systems, the method is designed for isolating pure and intact chloroplasts of Arabidopsis thaliana. Intact chloroplasts are isolated via Percoll gradient centrifugation. Chloroplasts are then allowed to take up [45Ca] or [54 ...
[摘要] 测定Ca 2 + 和Mn 2 + 的相对分布是分析在叶绿体包膜或类囊体中钙和/或锰转运蛋白水平发生变化的突变体的重要工具膜。该方案中描述的方法允许使用同位素[ 45 Ca]和[ 54 Mn]定量分析叶绿体基质和类囊体之间钙和锰离子的相对分布，作为放射性示踪剂。为了避免非叶绿体膜系统的污染，该方法被设计用于分离拟南芥的纯和完整的叶绿体。通过Percoll梯度离心分离完整的叶绿体。然后在轻孵育步骤期间使叶绿体吸收[ 45 Ca]或[ 54 Mn]。孵化后，叶绿体保持完整或渗透/机械处理以释放类囊体。通过液体闪烁计数可以确定掺入量[ 45 Ca]或[ 54 Mn]的量，并计算相对分布。
背景 钙和锰是光系统II的结构组分，形成无机Mn 4 O 5 O 5 O 3簇，其中水氧化发生电子，质子和分子氧的结果。通过叶绿体包膜和类囊体膜的Ca 2+ / +和/或超氧化物质是使得植物细胞满足PSII对这些阳离子的高需求的基本过程。在先前的研究中，使用来自豌豆植物的分离的类囊体膜（Ettinger等人）分析了Ca 2 + / H ...
|
|
|