| In vivo Mouse Mammary Gland Formation
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Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] For years, the mammary gland serves as a perfect example to study the self-renew and differentiation of adult stem cells, and the regulatory mechanisms of these processes as well. To assess the function of given genes and/or other factors on stemness of mammary cells, several In vitro assays were developed, such as mammospheres formation assay, detection of stem cell markers by mRNA expression or flow cytometry and so on. However, the capacity of reconstruction of whole mount in the cleared fat pad of recipient female mice is a golden standard to estimate the stemness of the cells. Here we described a step-by-step protocol for in vivo mammary gland formation assay, including preparation of “cleared” recipients and mammary cells for implantation, the surgery process and ...
[摘要] [摘要 ] 多年来，乳腺一直是研究成体干细胞的自我更新和分化以及这些过程的调控机制的完美例证。为了评估给定的基因和/或其他因素对乳腺细胞的干性，有几个函数体外测定法开发出来，如微球体由mRNA表达形成试验，干细胞标志物的检测或流式细胞术等。然而，在雌性小鼠清除的脂肪垫中整个坐骨的重建能力是估计细胞干性的黄金标准。在这里，我们描述了体内的分步操作方案 乳腺形成测定，包括准备“清除”的受体和用于植入的乳腺细胞，手术过程以及如何评估实验结果。结合通过基因编辑和/或药物处理对乳腺细胞的操作，该方案在乳腺干细胞和乳腺发育的研究中可能非常有用。
[背景 ] 作为哺乳动物最典型的器官之一，乳腺（MG）是外分泌腺，负责泌乳。MG的发育受某些性激素的控制，这些激素的水平精确地调节了MG在不同发育阶段的结构，细胞组成和功能变化（Henigighausen and Robinson，2005）。许多遗传和环境因素都参与了乳腺干细胞的调控和MG的发育。为了研究这些因素的功能和机理，已经开发了几种方法，特别是用于评估乳腺细胞的干性。先前的研究表明，只有MG的基底细胞而非管腔细胞能够在受体雌性小鼠清除的脂肪垫中重建上皮树，这表明乳腺干细胞仅存在于基底谱系中（Van Keymeulen 等，2011）。 ）。后来，包括我们在内的许多研究发现了乳腺干细胞的几种标志物（Prater ...
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| Intracaecal Orthotopic Colorectal Cancer Xenograft Mouse Model
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] The host microenvironment plays a prominent role in tumor growth, angiogenesis, invasion, metastasis, and response to therapy. Orthotopic tumor model mimics the natural environment of tumor development and provides an effective approach to investigate tumor pathophysiology and develop therapeutic strategies. This protocol describes the technique involving injection of colorectal cancer cell suspension into the intestinal wall of mice to establish an orthotopic colorectal tumor model.
[摘要] 宿主微环境在肿瘤生长，血管生成，侵袭，转移和治疗反应中起着重要作用。原位肿瘤模型模拟肿瘤发展的自然环境，并提供了一种有效的方法来研究肿瘤病理生理学和开发治疗策略。该方案描述了将结肠直肠癌细胞悬液注射到小鼠肠壁中以建立原位结肠直肠肿瘤模型的技术。
背景 已经开发了各种鼠模型来促进对人类癌症的研究，并且更好地了解有助于肿瘤生长的机制。虽然异位异种移植模型包括将癌细胞植入免疫受损小鼠的侧腹皮下，原位肿瘤模型由于将肿瘤细胞直接植入原发器官而更接近于原始肿瘤发展（Richmond和Su，2008）。虽然原位异种移植模型在技术上是具有挑战性和劳动密集型的，但由于肿瘤微环境的影响，原位移植物能够更准确地模拟人类肿瘤并更好地预测患者对化疗的反应与异位移植相比（Talmadge等， / em>。，2007）。随着关于肿瘤进展期间肿瘤宿主细胞相互作用的重要作用的知识的增加，使用免疫活性小鼠的遗传工程小鼠（GEM）模型扩展了我们模拟人类癌症复杂性的能力（Gopinathan和Tuveson，2008; Zitvogel等人。，2016）。然而，GEM模型更昂贵，通常需要数月至一年才能开发肿瘤，并且具有关于肿瘤频率，潜伏期和生长异质性的缺点。相比之下，异种移植物较便宜，需要更少的时间建立肿瘤，并具有更好的再现性（Vandamme，2014）。在本方案中，我们描述了通过将人癌细胞注射到免疫受损小鼠中产生原位结肠直肠癌的程序（Tseng等人，2007; ...
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| Simultaneous Intranasal/Intravascular Antibody Labeling of CD4+ T Cells in Mouse Lungs
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] CD4+ T cell responses have been shown to be protective in many respiratory virus infections. In the respiratory tract, CD4+ T cells include cells in the airway and parenchyma and cells adhering to the pulmonary vasculature. Here we discuss in detail the methods that are useful for characterizing CD4+ T cells in different anatomic locations in mouse lungs.
[摘要] 许多呼吸道病毒感染中CD4细胞反应已被证明是保护性的。在呼吸道中，CD4 + T细胞包括气道中的细胞和附着于肺血管的细胞和细胞。在这里，我们详细讨论了可用于表征小鼠肺不同解剖位置的CD4 + T细胞的方法。
背景 为了区分循环和组织中的记忆T细胞，已经开发了一种T细胞血管内染色的方法（Anderson等人，2012）。这种方法被广泛用于定义许多器官和组织（包括肺，脾和肠）的记忆T细胞。然而，呼吸道中的记忆T细胞位于三个独特的解剖位置，即气道，薄壁组织和肺血管。血管内染色不能区分气道和实质中的细胞，因为它们都是从循环中分离的，血管内施用的抗体不会污染这两个群体。我们设计了同时进行的鼻内/血管内抗体标记测定，可以使用最少量的抗体来标记和区分所有三个位置的细胞。
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