| Isolation, Culture and Differentiation of Adult Hippocampal Precursor Cells
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] There are two neurogenic niches in the adult mammalian brain: the subventricular zone of the lateral ventricle and the subgranular zone of the hippocampal dentate gyrus. Cells from these areas can be isolated and maintained in vitro, using two different culture systems to assess their potential regarding proliferation and differentiation in a reductionist model. While the neurosphere assay is primarily performed to directly study the proliferative and differentiation potential of cells in individual brains, the monolayer culture allows single cell analysis in a rather homogeneous cell population. Here, we describe the isolation, culturing methods and differentiation of neural precursor cells in both systems.
[摘要] 成年哺乳动物脑中有两个神经生态位：侧脑室下脑室区和海马齿状回颗粒下区。 来自这些区域的细胞可以在体外分离和维持，使用两种不同的培养系统评估它们在还原模型中的增殖和分化的潜力。 虽然神经球测定主要是为了直接研究个体脑中细胞的增殖和分化潜能，单层培养允许在相当均匀的细胞群中进行单细胞分析。 在这里，我们描述了两个系统中的神经前体细胞的分离，培养方法和分化。
【背景】在哺乳动物脑中，成人神经干细胞存在于两个主要神经生态位中，即海马齿状回（DG）的下颗粒区（SGZ）和室下区（SVZ）的侧脑室，其允许新生神经元成人的大脑。来自神经生态位的神经前体细胞可以在体外分离和培养以模拟细胞过程，尤其是增殖和分化。两种标准培养系统，贴壁单层培养（Palmer等人，1995; Ray等人，1995）和神经球测定（Reynolds和Weiss，1992和1996 ）在20世纪90年代被引入，代表了在体外研究神经祖细胞生物学的有价值的工具。
根据研究问题，每个系统都有其优点和缺点，在选择其中一种或另一种培养方法之前应该仔细考虑。在贴壁单层培养中，细胞生长相当孤立，形成更均匀的培养物。单层允许直接调查和监测单细胞水平的神经前体细胞。受控条件下的形态，增殖和分化等特征可以很容易地分析和可视化。然而，与神经球培养物相比，以单层培养的细胞代表更复杂的模型，因为细胞通常以更少的通常存在于细胞壁中的细胞 ...
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| Primary Culture of Mouse Neurons from the Spinal Cord Dorsal Horn
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Primary afferents of sensory neurons mainly terminate in the spinal cord dorsal horn, which has an important role in the integration and modulation of sensory-related signals. Primary culture of mouse spinal dorsal horn neuron (SDHN) is useful for studying signal transmission from peripheral nervous system to the brain, as well as for developing cellular disease models, such as pain and itch. Because of the specific features of SDHN, it is necessary to establish a reliable culture method that is suitable for testing neural response to various external stimuli in vitro.
[摘要] 感觉神经元的主要传入主要终止于脊髓背角，其在感觉相关信号的整合和调节中具有重要作用。小鼠脊髓背角神经元（SDHN）的原代培养可用于研究从周围神经系统到脑的信号传递，以及用于发展诸如疼痛和瘙痒的细胞疾病模型。由于SDHN的具体特征，有必要建立一种可靠的培养方法，适合于测试体外各种外部刺激的神经反应。
背景 不同于目前用于培养分离的小鼠来自海马或大脑皮质的原代神经元的方案，报道了很少的在体外培养SDHN的方法。该协议主要基于以前描述的方法（Hu et al。，2003; Hugel和Schlichter，2000）。在这里，我们进行了一些修改，包括试剂，食谱，解剖和描述从新生小鼠的初步SDHN的解剖和培养的分步程序。在该方案中，使用来自新鲜脊髓背角组织的酶（木瓜蛋白酶）消化方法直接获得神经元。体外SDHN的培养可以用于进一步的实验，例如电生理记录，免疫细胞化学和Ca 2+成像，其更好地支持脊髓中的细胞行为。
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