| FRAP: A Powerful Method to Evaluate Membrane Fluidity in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) is probably the most direct method to investigate the dynamics of molecules in living cells. Here, we describe FRAP to quantify membrane fluidity in C. elegans. Using FRAP, we have shown that cold, glucose and exogenous saturated fatty acids can decrease the fluidity of cellular membranes in certain mutants.
[摘要] FRAP（光漂白后的荧光恢复）可能是研究活细胞中分子动力学的最直接方法。 在这里，我们描述FRAP来量化 C中的膜流动性。线虫。 使用FRAP，我们已经表明冷，葡萄糖和外源饱和脂肪酸可以降低某些突变体中细胞膜的流动性。
【背景】生物膜，定义所有细胞的特征，主要由磷脂组成（Van Meer 等人，，2008）。存在于磷脂双层中的脂肪酸物质极大地影响其性质。例如，高饱和脂肪酸含量增加了膜的刚性，而高不饱和脂肪酸含量促进了流动性（Pilon，2016）。细胞膜的脂肪酸组成通常与膳食脂肪的组成明显相关，膳食脂肪可直接掺入磷脂中（Abbott et al。，2012; Dancy et al。，2015）。然而，考虑到饮食中存在广泛的变化，细胞必须具有调节机制，监测和调节膜组成并获得所需的膜性质，例如流动性，曲率，厚度，等等。使用FRAP对在肠道细胞中表达prenylated GFP的蠕虫，我们先前已经证明，缺乏PAQR-2（哺乳动物脂联素受体的同源物）的突变体在葡萄糖或富含饱和脂肪的饮食中培养时降低了膜流动性。酸（Svensk et al。，2016; Devkota et ...
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| Determination of NO and CSF Levels Produced by Bacillus subtilis
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] The cell-to-cell communication and division of labour that occurs inside a beneficial biofilm produce significant differences in gene expression compared with the gene expression pattern of cells grew under planktonic conditions. In this sense, the levels of NO (nitric oxide) and CSF (Competence Sporulation Stimulating Factor) produced in Bacillus subtilis cultures have been measured only under planktonic growth conditions. We sought to determine whether NO and/or CSF production is affected in B. subtilis cells that develop as a biofilm. To measure the production levels of the two prolongevity molecules, we grew B. subtilis cells under planktonic and biofilm supporting condition.
[摘要] 与浮游生物条件下生长的细胞的基因表达模式相比，有益生物膜内发生的细胞间细胞通讯和分裂产生显着的基因表达差异。 在这个意义上，仅在浮游生长条件下测量枯草芽孢杆菌培养物中产生的NO（一氧化氮）和CSF（能力孢子刺激因子）的水平。 我们试图确定是否NO和/或CSF生产受到影响。 枯草芽孢杆菌细胞作为生物膜发展。 为了测量两种长寿命分子的生产水平，我们生长了B。 枯草芽孢杆菌细胞在浮游生物膜支持条件下。
【背景】NO是关键的信号分子，在脊椎动物的各种生物过程中发挥作用（Kerwin等人，1995）。 ℃。 elegans 不能产生自己的NO，但是能够包含由B生产的NO。 （Cabreiro and Gems，2013; Gusarov et al。，2013; Kim，2013; Clark和Hodgkin，2014）。大多数生物体在通过由基因编码的酶NO合成酶催化的反应中，通过L-精氨酸向L-瓜氨酸的有氧转化而产生NO（Sudhamsu和Crane，2009）。 电子。 （OP50，HB101）（Cabreiro和Gems，2013; Kim，2013; Clark和Hodgkin，2014），其中几种常规用于喂食蠕虫（OP50，HB101），因为缺乏有氧NO生产，不太熟练功能副本 nos （Sudhamsu and ...
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| Culturing Bacteria from Caenorhabditis elegans Gut to Assess Colonization Proficiency
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Determining an accurate count of intestinal bacteria from Caenorhabditis elegans is one critical way to assess colonization proficiency by a given bacteria. This can be accomplished by culturing appropriate dilutions of worm gut bacteria on selective or differential agarized media. Because of the high concentration of bacteria in gut worm, dilution is necessary before plating onto growth media. Serial dilutions can reduce the concentration of the original intestinal sample to levels low enough for single colonies to be grown on media plates, allowing for the calculation of the initial counts of bacteria in the intestinal sample.
[摘要] 从秀丽隐杆线虫确定肠道细菌的准确计数是评估给定细菌的定殖能力的关键方法之一。 这可以通过在选择性或差异琼脂培养基上培养适当稀释的蠕虫细菌来实现。 由于肠蠕虫中细菌的浓度高，因此稀释必须在生长培养基上。 连续稀释可以将原始肠样品的浓度降低到足够低的浓度，使单个菌落生长在培养基平板上，从而计算肠样品中细菌的初始计数。
【背景】动物很少分离生活，但与微生物有关。主要与微生物之间的共生关系是Rosentberg和Zilber-Rosenberg在2011年的共生关系。在哺乳动物中，宿主 - 微生物共生相互作用主要发生在粘膜表面，最重要的是肠粘膜。当从野生新鲜分离时，线虫通常在其肠腔内容纳多种细菌菌群，使人联想到高等生物的微生物群落（Duveau和Felix，2012; Bumbarger等，2013）。相比之下，在实验室中，秀丽隐杆线虫通常保持在单一细菌菌株的存在下（Brenner，1974）。大多数情况下，这是革兰氏阴性细菌大肠杆菌。然而，有时使用其他物种，例如革兰氏阳性枯草芽孢杆菌（Garsin等，2003）。成虫蠕虫含有大约10,000个细菌细胞，比宿主蠕虫体细胞数量高10倍（Portal-Celhay和Blaser，2012）：或许巧合的是，这种微生物群与宿主细胞的比例与人类发现的相似。
正在使用不同的策略来测量秀丽隐杆线虫的细菌如异硫氰酸荧光素（FITC）标记的细菌，表达融合报告基因的细菌（绿色荧光蛋白[GFP]或β-半乳糖苷酶））的定殖能力。然而，更准确的方法是测量从蠕虫肠分离出的CFU的数量。在本协议中，我们展示了如何分离和计数秀丽隐杆线虫的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌菌株。在枯草芽孢杆菌的情况下，我们还展示了如何区分营养形式与秀丽隐杆线虫内部这种细菌形成的高度抗性孢子。 ...
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