Preparation, Stimulation and Other Uses of Adult Rat Brain Synaptosomes
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] In this paper, our protocol for preparation of brain synaptosomes is described. Synaptosomes are a valuable model system for analysis of structural components of the synapse as well as for investigation of synaptic function. Synaptosomal preparations are necessary for understanding molecular changes at synapses where critical post-translational modifications of synaptic proteins may occur. Not only are synaptosomes rich in synaptic proteins, but they can be used for analyzing uptake of neurotransmitters into synaptic vesicles and for analysis of the involvement of neurotransmitter synthesis and release. Synaptosomes can be stimulated with increased calcium influx to release neurotransmitters. Synaptosomal preparations have been used in characterizing calcium dependent phosphorylation and ...
[摘要] 在这篇论文中,我们描述了制备脑突触体的方案。突触体是用于分析突触的结构组分以及用于调查突触功能的有价值的模型系统。突触体制备对于理解可能发生突触蛋白的关键翻译后修饰的突触处的分子变化是必需的。突触小体不仅含有丰富的突触蛋白,还可用于分析神经递质向突触小泡的摄取和神经递质合成和释放的参与分析。可以用增加的钙内流刺激突触体释放神经递质。突触体制剂已被用于表征钙依赖性磷酸化和GABA合成酶GAD65(分子量为65kDa的L-谷氨酸脱羧酶)的活化。通过检查从突触体制剂获得的突触小泡膜上的蛋白质复合物,可以表征GAD65在GABA囊泡释放的偶联合成和囊泡摄取中的作用,这最终导致GABA囊泡释放GABA能神经传递的微调方法。
【背景】突触体制备方法在40多年前在神经科学研究实验室中建立,并且在涉及神经递质释放相关的细胞外钾升高以及对细胞内钙增加的应答方面具有极大的价值。除了阐明神经递质释放的过程之外,突触体制剂已经成为突触囊泡的有价值的来源。关于突触小泡的研究已经被用于表征参与偶联的神经递质合成和囊泡释放的蛋白质组分。突触体制剂作为突触囊泡分离的中间体也是非常有价值的,然后根据位于包含神经递质合成酶的囊泡膜上的蛋白质复合物进行分析。在这方面关键的意义在于包括CSP(胱氨酸 - ...
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Single-step Marker Switching in Schizosaccharomyces pombe Using a Lithium Acetate Transformation Protocol
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Date:
2016-12-20
[Abstract] The ability to utilize different selectable markers for tagging or mutating multiple genes in Schizosaccharomyces pombe is hampered by the historical use of only two selectable markers, ura4+ and kanMX6; the latter conferring resistance to the antibiotic G418 (geneticin). More markers have been described recently, but introducing these into yeast cells often requires strain construction from scratch. To overcome this problem we and other groups have created transformation cassettes with flanking homologies to ura4+ and kanMX6 which enable an efficient and time-saving way to exchange markers in existing mutated or tagged fission yeast strains.
Here, we present a protocol for single-step marker switching by ...
[摘要] 利用不同的选择标记来标记或突变粟酒裂殖酵母中的多个基因的能力受到仅仅两种可选择标记的历史使用的阻碍,即 +和 kanMX6 ;后者赋予抗生素G418(遗传霉素)抗性。最近已经描述了更多的标记物,但是将它们引入酵母细胞通常需要从头开始施加应变。为了克服这个问题,我们和其他团队已经创建了具有与 + 和 kanMX6 的侧翼同源性的转换盒,这使得能够有效和省时的方式在现有的突变或标记的裂变酵母菌株中交换标记。  在这里,我们提出了裂殖酵母,粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中醋酸锌转化的单步标记转换方案。以下我们将介绍如何将 ura4 + 标记交换到kanMX6 , natMX4 或 hphMX4标记,其分别对抗生素G418,海参(clonNAT)或潮霉素B提供抗性。我们还详细介绍了如何交换营养标记的任何 MX 标记,例如 arg3 + , his3 + , leu1 + 和 ura4 + 。
背景 这种用于粟酒裂殖酵母的单步骤标记交换方案允许将标记有类型的抗生素标记的任何标记或突变的基因替换为营养标记物(含有arg3 + , + ,并且已经构建了 ura4 + )并且为任何 MX交换遗传 ura4 + ...
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