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Date:
2016-12-05
[Abstract] Characterization of the molecular mechanisms of calcium (Ca2+) regulation of bacterial physiology and virulence requires tools enabling measuring and monitoring the intracellular levels of free calcium (Ca2+in). Here, we describe a protocol optimized to use a recombinantly expressed Ca2+-binding protein, aequorin, for detecting Ca2+in in Pseudomonas aeruginosa. Upon binding to free Ca2+, aequorin undergoes chromophore oxidation and emits light, the log of which intensity linearly correlates with the amount of bound Ca2+, and therefore, can be used to measure the concentration of free Ca2+ available for binding. This protocol involves the introduction of the aequorin gene into P. ...
[摘要] 钙的分子机制的表征（Ca 2+ 2+）调节细菌生理学和毒力需要能够测量和监测游离钙的细胞内水平的工具（Ca 2+ 2+ in ）。在这里，我们描述了优化使用重组表达的Ca 2+ 2+结合蛋白水母发光蛋白的方案，用于检测 em>铜绿假单胞菌 。在结合游离Ca 2+ 2+时，水母发光蛋白经历发色团氧化并发射光，其强度与结合的Ca 2+ 2+的量线性相关，因此，可以可用于测量可用于结合的游离Ca 2+的浓度。该方案包括将水母发光蛋白基因导入em。铜绿假单胞菌，诱导脱辅基水母发光蛋白产生，用其发色团重建全酶并监测其发光。该方案允许在体内响应于各种刺激连续测量Ca <2> 浓度。 关键词：/strong>细胞内钙，调节，水母发光，发光，腔肠素，绿脓杆菌 [背景] Ca 2 + 调节P的生理学和毒力。铜绿假单胞菌（Guragain等人，2013; Patrauchan等人，2005; Sarkisova等人，2014），然而，Ca 2 + 调节的分子机制尚不清楚。为了表征这些机制，非常重要的是不仅测量Ca 2+中的Ca 2+的浓度（[Ca 2+] + ]），但监测其响应各种刺激的变化。考虑到细胞生理学中的甚至微小的改变，[Ca 2 + ]可能改变（综述于[Dominguez等人， ]），测量[Ca 2+ 2+]需要特异性识别Ca ...
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