| Quantification of Salicylic Acid (SA) and SA-glucosides in Arabidopsis thaliana
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Homeostasis between the cytoplasmic plant hormone salicylic acid (SA) and its’ inactive, vacuolar storage forms, SA-2-O-β-D-glucoside (SAG) and SA-β-D-Glucose Ester (SGE), regulates the fine-tuning of defense responses to biotrophic pathogens in Arabidopsis thaliana. This protocol describes a simplified, optimized procedure to extract and quantify free SA and total hydrolyzable SA in plant tissues using a classical HPLC-based method.
[摘要] 细胞质植物激素水杨酸（SA）与其无活性的液泡形式，SA-2-葡萄糖苷（SAG）和SA-β-D-葡萄糖酯之间的稳态 （SGE）规定了拟南芥中对营养性病原体防御反应的微调。 该协议描述了一种简化的优化程序，使用传统的基于HPLC的方法提取和定量植物组织中的游离SA和总可水解SA。
【背景】SA（2-羟基苯甲酸）是植物激素，其在叶绿体中响应于病原体攻击而合成。然后输出到细胞质中，在细胞质中建立局部和系统获得性抗性（SAR）。在广义方案中，植物对生物营养性病原体的抗性被认为是通过SA信号传导介导的，而对于坏死性病原体的抗性受茉莉酸（JA）和乙烯（ET）控制。 SA和JA / ET信号通路相互作用。 SA积累到高浓度是有毒的并导致细胞和组织损伤。因此，大多数病原体诱导的SA被UDP-葡糖基转移酶（UGT）糖基化以形成亲水的，无毒的SAG和SGE（Noutoshi等人，2012; George Thompson等人， 2017）。然后将SAG和SGE隔离在液泡中，在那里它们形成水解成活性SA的可重复使用的来源。因此，植物组织中增加的总SA（SA + SAG / ...
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| Sterol Analysis in Kluyveromyces lactis
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Sterols are essential lipids of most eukaryotic cells with multiple functions (structural, regulatory and developmental). Sterol profile of yeast cells is often determined during the studies of ergosterol synthesis mutants used to uncover a number of functions for various sterols in yeast cells. Molecular studies of ergosterol biosynthesis have been also employed to identify essential steps in the pathway against which antifungals might be developed. We present here a protocol for the isolation of non-saponifiable lipids (sterols) from Kluyveromyces lactis yeast cells and a chromatographic method for quantitative analysis of sterols in lipid extracts (HPLC) that can be performed in laboratories with standard equipment.
[摘要] 甾醇是具有多种功能（结构，调节和发育）的大多数真核细胞的必需脂质。 在用于揭示酵母细胞中各种甾醇的许多功能的麦角甾醇合成突变体的研究期间，酵母细胞的甾醇分布通常被确定。 麦角甾醇生物合成的分子研究也被用于鉴定可能开发抗真菌剂途径的基本步骤。 我们在这里介绍从乳酸克鲁维酵母酵母细胞中分离不皂化脂质（甾醇）的方案和用于在实验室中用标准设备进行的脂质提取物（HPLC）中固醇的定量分析的色谱法。
【背景】在酵母细胞中发现的主要膜固醇的麦角固醇在哺乳动物系统中与胆固醇相似的细胞膜中起着结构的作用。通过影响膜的刚性，流动性和渗透性，甾醇已被证明对膜的许多重要物理特征负责。通过它们与磷脂和鞘脂的相互作用，提出甾醇以维持蛋白质的侧向异质性和质膜中的脂质分布，因为它们在诱导称为脂筏的微区域中的推定作用（Dupont等人，2011; Souza等， 2011）。酵母中的甾醇生物合成是一种能量昂贵的多步需氧过程，需要血红素和分子氧。谷歌甾醇及其生物合成步骤是对宿主生物体胆固醇合成影响较小的抗真菌化合物的主要目标（Daum等，1998）。麦角甾醇及其一些生物合成中间体（角鲨烯，7-脱氢胆固醇）均属于直接吸引人的化学物质。因此，用于甾醇分离的简单可靠的方法是非常有益的（Valachovic和Hapala，2017）。在该方案中，我们描述了用于测定酵母细胞中甾醇分布的固醇分离的分析方法。
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| Quantitative Determination of Ascorbate from the Green Alga Chlamydomonas reinhardtii by HPLC
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2016-12-20
[Abstract] Ascorbate (Asc, also called vitamin C) is of vital importance to the cellular functions of both animals and plants. During evolution, Asc has become one of the most abundant metabolites in seed plants; however, Asc contents in cyanobacteria, green algae and bryophytes are very low. Here we describe a sensitive and reliable HPLC method for the quantitative determination of cellular Asc content in the green alga Chlamydomonas reinhardtii.
[摘要] 抗坏血酸（Asc，也称为维生素C）对动物和植物的细胞功能至关重要。 在进化过程中，Asc已经成为种子植物中最丰富的代谢物之一; 然而，蓝藻，绿藻和苔藓植物中的Asc含量非常低。 在这里，我们描述了一种灵敏可靠的HPLC方法，用于定量测定绿藻衣藻中细胞Asc含量。
背景 针对高等植物开发了用于确定细胞Asc含量的先前方案，其中细胞Asc的量足够高以用于分析。 这些方案不适用于绿色藻类，因为植物材料的量和细胞Asc的水平通常都受到限制。 因此，需要开发一种灵敏度提高到μM范围来测量绿藻中细胞Asc的新方法。
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